水產品中磺胺二甲嘧啶間接競爭ELISA（ciELISA）檢測法的建立及初步應用.pdf

1、本文分兩部分，第一部分將磺胺二甲嘧啶(SM2)與牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)利用優(yōu)化的重氮化法進行偶聯，分別作為免疫原及包被原，免疫原注射免疫新西蘭大白兔獲得多抗血清。第二部分建立了快速檢測水產品中殘留磺胺二甲嘧啶的間接競爭ELISA方法，并通過對比實驗，對檢測過程中的各項條件進行優(yōu)化。 研究方法和結果如下：用重氮化法將SM2與載體蛋白BSA偶聯制備人工合成抗原SM2-BSA，以此作為免疫原，同法合成包被抗原S

2、M2-HSA。選擇常規(guī)免疫程序，免疫2～3月齡新西蘭大白兔，獲得多抗SM2抗血清，結果表明抗血清特異性針對SM2。用間接ELISA法測定抗血清效價，同時，利用ELISA方法對抗血清進行性質鑒定，分別以HSA、SM2-HSA、BSA及SM2-BSA進行包被，結果表明抗血清中存在抗SM2抗體，所獲得的抗血清基本符合實驗要求。 用所制備的抗血清建立了間接競爭ELISA檢測SM2方法。利用對比實驗，優(yōu)化ELISA工作條件，方陣滴定法確定

3、理想SM2-HSA包被抗原的濃度為1.0μg/ml，酶標二抗(羊抗兔IgG-HRP)工作濃度為1：1000以及多抗(SM2-PcAb)血清的工作濃度為1：3200。以上述實驗條件為基礎，以系列稀釋的SM2標準溶液作為檢測對象，繪制標準曲線，擬和的線性回歸直線方程為y=88.323-18.013x，相關系數R2=0.9964，從標準曲線可以得知，此方法可測定的最適范圍為10～200μg/L，最小檢測限約為1.89μg/L。本實驗所建立的E

4、LISA方法的精確度以批內誤差(孔間差異)和批間誤差(板間差異)表示，結果表明孔間差異和板間平均差異分別為2.56％和5.14％，這表明方法精確度較好。添加回收率實驗測得凡納濱對蝦肌肉樣本和牙鲆肌肉均回收率為90.98％±3.32％和90.02％±2.68％在可測定濃度范圍內，磺胺二甲嘧啶(SM2)抗血清與磺胺甲噁唑、氯霉素、紅霉素、恩諾沙星、甲氧芐啶、呋喃唑酮等可能會因同時使用而導致共同殘留的抗微生物藥物未顯示免疫交叉反應性，與結構相