外顯子組測序鑒定一個新的高度近視致病基因P4HA2.pdf

1、背景:近視(Myopia)是一種眼睛屈光不正的狀態(tài)，主要的特征為平行光線在黃斑中心凹的前面聚焦造成的視力模糊。近視可伴隨有眼底萎縮變性、視網(wǎng)膜脫落、黃斑出血，嚴重時甚至可至失明，是嚴重影響患者視力健康乃至生存質(zhì)量的一種重要疾病，在致盲眼病中居第6位。
　　目前已在多個不同民族和地區(qū)完成高度近視的全基因組掃描和遺傳連鎖分析。已經(jīng)定位的位點包括:1p36，2q37.1，3q26，4q12等。報道的相關(guān)致病基因包括:SCO2，LEPRE

2、L1，ZNF644，SLC39A5等。
　　目的:鑒定高度近視的致病基因。
　　方法:本研究所招募的高度近視家系(HM-SR3-2)由中南大學醫(yī)學遺傳學國家重點實驗室采集，患者均來自株洲。研究對象納入標準為近視600°(-6.00OD)以上。該高度近視家系患者由中南大學湘雅二醫(yī)院眼科兩名主治以上?？漆t(yī)生共同診斷。該家系呈現(xiàn)典型的常染色體顯性遺傳趨勢，患者表現(xiàn)為高度近視且進行性加重。高度近視185例散發(fā)病人均由湘雅二醫(yī)院眼科收

3、集，符合納入標準。我們在HM家系中選取兩個患者和一個正常人，應(yīng)用外顯子組測序的方法分析他們所有外顯子序列。然后我們運用Sanger測序法在此家系中分別驗證外顯子組測序的結(jié)果。運用Sanger測序法在散發(fā)病人中進行測序驗證。利用QPCR方法檢測病人淋巴細胞中mRNA表達。利用免疫印跡方法檢測病人淋巴細胞中蛋白水平變化。
　　結(jié)果:根據(jù)外顯子組測序結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)P4HA2基因c.871 G＞A雜合突變在家系中與疾病共分離，且此突變位點

4、未在209例正常人中發(fā)現(xiàn)。在185例散發(fā)患者中，發(fā)現(xiàn)P4HA2基因c.448 A＞G，c.419 A＞G，c.1349-1350delGT，c.1327A＞T雜合突變，且在300例正常人中未發(fā)現(xiàn)。QPCR結(jié)果提示，患者淋巴細胞中P4HA2mRNA表達量低于正常人，且在加入吐根堿之后達到正常人表達水平。Western blot的結(jié)果顯示，患者P4HA2蛋白表達量降低。
　　結(jié)論:該家系中患者均帶有P4HA2的c.871G＞A突變，該