椎體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)活性及對大鼠退變椎間盤作用的實驗研究.pdf

1、第一部分大鼠椎體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的體外生物學(xué)活性研究
　　目的：分離培養(yǎng)大鼠椎體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，探討其在體外培養(yǎng)增殖時的生物學(xué)活性。
　　方法：用骨髓沖洗法收集大鼠椎體和髂骨內(nèi)的骨髓，密度梯度離心法和貼壁法分離并純化骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，進行體外擴增，并檢測各組細(xì)胞增殖活性，繪制生長曲線。用流式細(xì)胞鑒定檢測細(xì)胞表面標(biāo)記CD90、CD34、CD29和CD44等表達(dá)情況。分別對兩組細(xì)胞進行成骨誘導(dǎo)分化，并用茜素紅染色鑒定誘導(dǎo)分化結(jié)果。<

2、br>　　結(jié)果：兩組骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體外擴增迅速，均隨培養(yǎng)時間延長而增殖，椎體組增殖活性大于髂骨組(P<0.05)。流式細(xì)胞鑒定顯示兩組細(xì)胞均表達(dá)CD90、CD29和CD44，不表達(dá)CD34。兩組細(xì)胞誘導(dǎo)分化后行茜素紅染色均成陽性，椎體組鈣結(jié)節(jié)染色較髂骨組明顯。
　　結(jié)論：椎體骨髓分離培養(yǎng)出的干細(xì)胞能很好的表達(dá)BMSCs的生物學(xué)特性，增殖活性和誘導(dǎo)分化潛能均強于髂骨骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，可以成為組織工程種子細(xì)胞的可靠來源。
　　第二

3、部分椎體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞注射對鼠退變椎間盤作用的初步研究
　　目的：建立并驗證大鼠尾椎間盤退變模型，探討椎體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞注射對鼠尾椎間盤退變的作用。
　　方法：選取健康3月齡SD大鼠40只，對大鼠尾椎間盤用細(xì)針穿刺纖維環(huán)法誘導(dǎo)退變，造模2周后拍攝X光片觀察造模效果，選取產(chǎn)生退變的大鼠27只，隨機分為B組(退變組)、C組(培養(yǎng)基注射組)和D組(干細(xì)胞注射組)，另選取未造模大鼠6只作為對照組(A組)。每組又分為一周組、二周組和四

4、周組三個亞組。干細(xì)胞組造模椎間盤內(nèi)注射骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，培養(yǎng)基注射組造模椎間盤內(nèi)注射等體積培養(yǎng)基，對照組、退變組不予特殊處理。分別于造模后1周、2周、4周抽取3只B、C、D三組大鼠和2只A組大鼠麻醉后拍攝尾椎正位片，測量椎間盤高度，并計算椎間盤高度指數(shù)。放射學(xué)檢查后對抽取的大鼠實施過量麻醉處死，取出椎間盤和相鄰的上下部分椎體，固定、切片，行HE染色和番紅-固綠染色觀察椎間盤組織學(xué)改變，用1，9-二甲胺基甲基藍(lán)結(jié)合法檢測椎問盤內(nèi)GAG含量。

5、
　　結(jié)果：放射學(xué)、生物化學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，和對照組相比，退變組和培養(yǎng)基注射組的椎間盤高度、椎問盤內(nèi)GAG含量表達(dá)水平均有不同程度降低(P<0.05)，并表現(xiàn)出隨時間下降的趨勢。而干細(xì)胞組與退變組和培養(yǎng)基組相比，上述指標(biāo)均表現(xiàn)出一定的改善趨勢，在注射4周后椎間盤高度指數(shù)和GAG含量有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。組織學(xué)觀察到造模后退變組和培養(yǎng)基組隨時間延長，椎間盤退變逐漸加重，而干細(xì)胞組與退變組和培養(yǎng)基組相比，退變程度有所減輕。