PC-1基因表達(dá)細(xì)胞模型的建立及其與腫瘤相關(guān)性研究.pdf

1、目的:PC-1基因是在骨轉(zhuǎn)移和雄激素非依賴性的前列腺癌細(xì)胞中異常高表達(dá)的新基因.該研究擬建立穩(wěn)定表達(dá)外源PC-1基因的小鼠成纖維細(xì)胞株,為進(jìn)一步研究PC-1基因的生物學(xué)功能提供實(shí)驗(yàn)材料.在此基礎(chǔ)上通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn),觀察PC-1基因的表達(dá)對(duì)NIH3T3細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,探討它與細(xì)胞轉(zhuǎn)化、腫瘤形成的關(guān)系,為進(jìn)一步研究PC-1基因與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ).結(jié)論:1.采用巢式PCR技術(shù),從原始克隆質(zhì)粒pZHR3,擴(kuò)增

2、出人PC-1全長(zhǎng)693bp cDNA片段(包括保護(hù)性堿基、酶切位點(diǎn)和CCACC序列在內(nèi)),并構(gòu)建了含此片段的真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)/myc-his-pc-1.2.利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/myc-his-pc-1轉(zhuǎn)染入小鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3,經(jīng)G418篩選獲得陽(yáng)性細(xì)胞克隆.3.經(jīng)PCR鑒定外源PC-1基因已經(jīng)整合至NIH3T3細(xì)胞,RT-PCR及Western blot技術(shù)證實(shí),外源PC-1基因已