利用重組腺病毒載體進行腫瘤基因治療的研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學博士后學位論文利用重組腺病毒載體進行腫瘤基因治療的研究姓名：韓力薇申請學位級別：博士后專業(yè)：腫瘤學指導(dǎo)教師：陸陽陳紅專20020601對正常細胞不產(chǎn)生影響。而且，因為在一般情況下，只有肝癌組織的細胞能夠產(chǎn)生AFP，一旦肝癌完全治愈后，即使還有腺病毒存在，治療基因也不能表達，這樣同時解決了治療基因的表達調(diào)控問題。H102D是上海三維生物技術(shù)有限公司構(gòu)建的重組溶瘤性腺病毒，它刪除了人v型腺病毒的E1B區(qū)和E3區(qū)，插入AFP啟

2、動子為特異性啟動子，同時插入TRAIL(王NF—RelatedApoptosisInducingLigand)基因。在AFP啟動子的調(diào)控下，H102D通過以下兩方面機理來治療肝癌：(1)在AFP陽性的肝癌細胞中選擇性復(fù)制，產(chǎn)生溶瘤作用，殺死肝癌細胞；(2)在AFP陽性的肝癌細胞中表達TRAIL基因，誘導(dǎo)肝癌細胞發(fā)生凋亡。細胞感染H102D后的生長曲線檢測結(jié)果顯示，高MOI感染時，H102D能顯著抑制AFP陽性肝癌細胞的生長。以同樣的MO

3、I感染AFP陰性的WI一38細胞和張氏肝細胞，細胞生長基本不受影響。說明AFP能有效地調(diào)控基因治療腺病毒的復(fù)制和治療基因的表達，使H102D只在AFP陽性的肝癌細胞中選擇性復(fù)制并表達TRAIL基因誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡。H103是上海三維生物技術(shù)有限公司在H10l的基礎(chǔ)上開發(fā)的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的基因治療用重組腺病毒產(chǎn)品，刪除了腺病毒的E1B區(qū)和E3區(qū)，插入CMV啟動子和重組熱休克蛋白70(Hsp70)基因，可在腫瘤組織中復(fù)制，殺死腫瘤細胞，并

4、且能激活機體免疫，對遠端的轉(zhuǎn)移腫瘤也有較好的療效。通過實驗摸索，我們建立了對H103中的插入基因CMv—HSP的PCR檢測方案。經(jīng)鑒定，H103病毒DNA中含有正確大小的插入基因片段。為了在今后的前期實驗和臨床試驗中從組織樣品中檢測出低濃度的H103DNA，我們另外設(shè)計了一對針對CMV和部分HSP的引物：A43一l和HLW一1，它的產(chǎn)物大小只有1kb左右。利用這對引物，我們對CMV～HSP插入基因進行了梯度PCR檢測。結(jié)果顯示：采用Ta