SSX基因家族HLA-A0201限制性CTL共同表位預(yù)測(cè)、鑒定及其交叉反應(yīng)性研究.pdf

1、基于抗原表位肽的疫苗，由于其中表位肽的化學(xué)成分相對(duì)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、容易構(gòu)建、可以避免各種污染及潛在的致癌物質(zhì)等方面的優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)成為腫瘤免疫治療研究的主要策略之一。目前這種疫苗形式中的抗原表位肽主要是來(lái)源于腫瘤/睪丸抗原(Cancer/testisantigen，CT抗原)。SSX基因家族是CT抗原之一，與其它多成員組成的CT抗原家族一樣，它由9個(gè)不同成員組成。在某一種腫瘤細(xì)胞中不會(huì)同時(shí)表達(dá)所有SSX家族成員，而是僅表達(dá)其中一種或幾種。如對(duì)6

2、種不同組織類型的10個(gè)滑膜肉瘤細(xì)胞系，進(jìn)行SSX-1、SSX-2、SSX-3、SSX-4、SSX-5的mRNA表達(dá)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)陽(yáng)性率分別為90％、50％、10％、60％和50％，兩種以上基因同時(shí)表達(dá)的達(dá)60％，全部此類腫瘤細(xì)胞至少表達(dá)一種上述基因。而對(duì)26例原發(fā)性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)組織進(jìn)行SSX-1、SSX-2和SSX-5的mRNA表達(dá)分析，其表達(dá)陽(yáng)性率分別為61.5％、34.6％和46.

3、2％，兩種以上基因同時(shí)表達(dá)的有4例(15.4％)，至少有一種基因表達(dá)的有17例(65.4％)。因而針對(duì)其中某一種成員的抗原表位肽腫瘤疫苗的實(shí)際應(yīng)用將會(huì)存在一定的局限性?；诖?，研究開(kāi)發(fā)能同時(shí)針對(duì)整個(gè)SSX家族所有成員的表位肽疫苗將會(huì)有廣闊的應(yīng)用前景。 本課題將SSX家族的9個(gè)成員分別輸入林治華教授基于超基序結(jié)合量化基序列開(kāi)發(fā)的CTL表位預(yù)測(cè)軟件，并結(jié)合著名的美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究所的BIMAS軟件(http：//www-bimas.c

4、it.gov/molbio/hla_bind/)和德國(guó)海德堡生物醫(yī)學(xué)信息中心根據(jù)特定肽的錨定殘基和輔助殘基位置的氨基酸類型來(lái)評(píng)分的SYFPEITHI軟件 (http：//www.syfpeithi.de/)，分析它們的預(yù)測(cè)結(jié)果。發(fā)現(xiàn)SSX57-65是所有成員中預(yù)測(cè)分值相對(duì)較高的肽片段，并且它們之間的序列相似程度非常高，僅在第1、8、9位上有所區(qū)別，而其它位點(diǎn)序列完全一致。根據(jù)這些結(jié)果，我們合成了可以代表SSX57-65全部成員的

5、4條肽，即(1)P1：AMTKLGFKA(SSX-2，SSX-3，SSX-5，SSX-7，SSX-9)，(2)P4：AMTKLGFNV(SSX-6，SSX-8)，(3)P5：AMTKLGFKV(SSX-1)，(4)P6：VMTKLGFKV(SSX-4)。在分析此4條預(yù)測(cè)表位肽與MHC-Ⅰ分子結(jié)合的親和力大小和結(jié)合穩(wěn)定性的基礎(chǔ)上，我們?cè)儆盟鼈冊(cè)隗w外刺激健康人PBMC，用可以評(píng)價(jià)特異性CTL的INF-γ/ELISPOT和細(xì)胞毒功能的51Cr

6、釋放實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)這些表位肽的免疫學(xué)效應(yīng)；最后，進(jìn)一步分析這些表位肽誘導(dǎo)的CTL，對(duì)不同的表位肽的交叉反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)研究顯示，在親和力測(cè)定中，這些預(yù)測(cè)的SSX57-65表位肽除P1外，P4、P5、P6等3條肽都隨著表位肽濃度的增加，而表現(xiàn)與MHC-Ⅰ分子結(jié)合的親和力增強(qiáng)；而在結(jié)合穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中，P1和P4與MHC-Ⅰ分子結(jié)合的穩(wěn)定性優(yōu)于P5和P6。在評(píng)價(jià)免疫學(xué)效應(yīng)的檢測(cè)中，P4誘導(dǎo)的特異CTL分泌INF-γ的能力和細(xì)胞毒功能，都優(yōu)于其它

7、3條肽，且在交叉激活評(píng)估中表現(xiàn)出同樣的結(jié)果。 根據(jù)這些結(jié)果，說(shuō)明SSX57-65表位肽可以作為SSX家族不同成員之間共同的抗原表位肽，且P4(AMTKLGFNV)可以視為SSX57-65表位肽中的“超級(jí)表位肽”。后續(xù)的研究可以根據(jù)文獻(xiàn)中成功的表位肽改造方法，對(duì)P4個(gè)別氨基酸進(jìn)行替換，以期在抗原性沒(méi)有改變的情況下，進(jìn)一步提高P4表位肽的交叉激活能力，使其成為高效“超級(jí)表位肽”?？梢灶A(yù)期這種“超級(jí)表位肽”能夠成為對(duì)多成員組成的SSX