P5D2對(duì)宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用.pdf

1、目的：建立宮頸鱗癌細(xì)胞HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC模型，初步探討多細(xì)胞球體中整合素β1的表達(dá)與浸潤(rùn)內(nèi)皮細(xì)胞的關(guān)系，以及抗整合素β1單克隆抗體P5D2對(duì)HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用。 方法： （一）：建立宮頸鱗癌細(xì)胞HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)單層人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系HUVEC模型（以下均簡(jiǎn)稱宮頸鱗癌HCE1浸潤(rùn)模型）：將HCE1多細(xì)胞球體與HUVEC細(xì)胞共同培養(yǎng)，在模型建立的第0，1，4，7天分別

2、用倒置顯微鏡拍攝HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)單層HUVEC細(xì)胞的程度。用Motic med數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)軟件計(jì)算處理HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)的范圍。 （二）：免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法檢測(cè)HCE1單層細(xì)胞、HCE1多細(xì)胞球體以及HUVEC細(xì)胞中整合素β1的表達(dá)。 （三）：P5D2對(duì)HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用 1.分組：干預(yù)組P5D2終濃度為1ug/ml，對(duì)照組為等濃度的mIgG。 2.觀察：在模型

3、建立的第0，1，4，7天分別用倒置顯微鏡拍攝兩組模型中HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)單層HUVEC細(xì)胞的程度。用Motic med數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)軟件計(jì)算處理兩組模型中HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)的范圍。 3.免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法檢測(cè)P5D2干預(yù)宮頸鱗癌HCE1浸潤(rùn)模型后和對(duì)照組第4天整合素β1表達(dá)。 結(jié)果： （一）宮頸鱗癌HCE1浸潤(rùn)模型的建立。 1.HCE1單層細(xì)胞培養(yǎng)：顯微鏡下見細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞胞漿透

4、亮，細(xì)胞貼壁后呈不規(guī)則對(duì)角形。 2.HCE1多細(xì)胞球體培養(yǎng)：HCE1細(xì)胞旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)24小時(shí)可見細(xì)胞聚集成團(tuán)，并隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，結(jié)構(gòu)更加緊密，直徑逐漸增大，培養(yǎng)至第4天開始出現(xiàn)壞死核心。 3.HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)：胞體呈多角形，相互嵌合，為單層呈鋪路石狀排列。 4.宮頸鱗癌HCE1浸潤(rùn)模型：倒置顯微鏡下觀察7天，在鏡下能很明顯的區(qū)分HCE1多細(xì)胞球體和HUVEC單層細(xì)胞，將宮頸鱗癌HCE1多細(xì)胞球體與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

5、HUVEC共同培養(yǎng)1小時(shí)，鏡下見HCE1多細(xì)胞球體緊密粘附于HUVEC單層細(xì)胞上，搖之不動(dòng)，但不在一個(gè)焦距平面。宮頸鱗癌HCE1浸潤(rùn)模型建立第1天，鏡下見HCE1多細(xì)胞球體出現(xiàn)解聚，向周圍HUVEC細(xì)胞擴(kuò)散。第4天，鏡下見HCE1多細(xì)胞球體侵入HUVEC細(xì)胞，替代HUVEC細(xì)胞退縮的部位，形成侵襲聚集點(diǎn)，中間可見壞死核心，周圍可見單層HCE1細(xì)胞生長(zhǎng)暈，HCE1多細(xì)胞球體與HUVEC細(xì)胞呈同一聚焦平面。第7天，鏡下見HCE1多細(xì)胞球體占

6、據(jù)面積更大，邊界與HUVEC細(xì)胞融合欠清。 （二）：免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法檢測(cè)整合素β1的表達(dá)： HCE1多細(xì)胞球體中整合素β1陽性高表達(dá)率高于HCE1單層細(xì)胞，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組比較差異有顯著性（Pearson X2=19.20，P<0.005），HUVEC細(xì)胞中整合素β1陰性表達(dá)。 （三）：P5D2對(duì)HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用 1.P5D2干預(yù)后宮頸鱗癌HCE1浸潤(rùn)模型：倒置顯微鏡下觀察7天，藥物

7、干預(yù)后的模型浸潤(rùn)程度明顯小于對(duì)照組，P5D2干預(yù)后第1天，鏡下見HCE1多細(xì)胞球體解聚，浸潤(rùn)面積稍小于mIgG組，降低了32.16％，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組差異有顯著性（p<0.001）。第4天鏡下與mIgG組相比，浸潤(rùn)面積明顯降低，達(dá)60.77％，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組差異有顯著性（p<0.001）。第7天鏡下與mIgG組相比，浸潤(rùn)面積經(jīng)P5D2阻斷更顯著，較對(duì)照組降低了84.68％，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組差異有顯著性（p<0.001）。 2.

8、免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法檢測(cè)P5D2干預(yù)宮頸鱗癌HCE1浸潤(rùn)模型后第4天整合素β1表達(dá)：對(duì)照組整合素β1的陽性高表達(dá)率高于P5D2干預(yù)后宮頸鱗癌HCE1浸潤(rùn)模型，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩者比較差異有顯著性（Pearson X2=21.69，P<0.005）。 結(jié)論： 1成功建立HCE1多細(xì)胞球體浸潤(rùn)單層人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECC模型。2整合素β1在多細(xì)胞球體、浸潤(rùn)模型中的表達(dá)上調(diào)可能與細(xì)胞粘附力、侵襲力增強(qiáng)有關(guān)。3抗整合素β1單克