IL-1β聯(lián)合TNF-α預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細胞促進血管細胞黏附分子-1的表達及改善缺血后心功能.pdf

1、研究背景：心肌缺血損傷后,心肌細胞釋放大量炎癥介質(zhì)作為對心肌損傷的應(yīng)答,梗死及缺血區(qū)的炎癥因子有助于心肌組織對損傷的修復(fù)和適應(yīng)。多種炎癥因子刺激骨髓間充質(zhì)干細胞可以激活一系列的生物學(xué)過程,包括激活干細胞的旁分泌,從而增強移植后干細胞生物學(xué)功能及提高移植的干細胞對心梗后心功能的保護作用。
　　目的：研究炎癥因子白介素-1β(IL-1β)與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)預(yù)處理對骨髓間充質(zhì)干細胞(BMMSCs)的遷移黏附能力的影響,對其

2、表達血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)及移植于缺血心肌后對心梗后大鼠左室心功能的影響。并且探究兩因子聯(lián)合預(yù)處理是否可以增強這一作用。
　　方法：體外遷移實驗中用將對照及不同處理處的細胞置于transwell小室的上層,下層培養(yǎng)液中加入不同處理組對應(yīng)的細胞因子,共培養(yǎng)12小時后檢測遷移至小室下層的細胞數(shù)目。用IL-1β(10ng/ml,20mg/ml)、TNF-α(10ng/ml,20mg/ml)、IL-1β(10ng/ml)+T

3、NF-α(10ng/ml)預(yù)處理BMMSCs,對照組不添加任何因子,以上各不同處理組的細胞用于后續(xù)實驗。24 h后,消化細胞進行體外黏附實驗,將細胞調(diào)整濃度后重懸接種于細胞板,靜置后洗去未黏附的細胞,拍照計數(shù)粘附的細胞數(shù)目。流式細胞檢測中消化收集細胞并用PE-VCAM-1染色后流式細胞儀檢測VCAM-1的表達。提取細胞RNA后逆轉(zhuǎn)錄及擴增實驗檢測對照組及處理組細胞的VCAM-1的mRNA的表達變化。細胞加熱變性后,Western-blo

4、t實驗檢測各組細胞的VCAM-1在蛋白平上的表達。動物實驗按如上分組移植BMMSCs于梗死邊緣區(qū),4周后二維超聲心動圖檢測大鼠收縮舒張末期左室內(nèi)徑大小及左室射血分數(shù),冰凍切片檢測移植后心肌內(nèi)DAPI染色的干細胞核,Masson染色檢測心肌內(nèi)膠原的表達。
　　結(jié)果：與對照組相比,IL-1β及TNF-α預(yù)處理明顯增加的BMMSCs的遷移黏附能力,并且細胞因子預(yù)處理明顯增加了干細胞的VCAM-1在基因及蛋白水平上的表達,同時移植細胞因子

5、預(yù)處理的干細胞明顯減小了心肌梗死后大鼠左室收縮及舒張末期左室內(nèi)徑的增大,同時改善了大鼠的心功能(P<0.01)。用20ng/ml處理干細胞與10ng/ml組相比,細胞的遷移黏附能力均有所增強,VCAM-1的在基因及蛋白水平上增加,大鼠的射血分數(shù)也不同程度增加,但是這些增加沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而 IL-1β及 TNF-α的低劑量聯(lián)合處理組在細胞的遷移黏附能力及VCAM-1表達上明顯高于20ng/ml組,同時大鼠左室心功能也顯著