補(bǔ)體C3a活性片段對(duì)大鼠部分肝移植后肝再生的影響.pdf

1、目的：1.探討建立穩(wěn)定的大鼠部分肝移植(partial livertransplantation)動(dòng)物模型的方法和手術(shù)技巧，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)提供能夠長(zhǎng)期存活的穩(wěn)定的部分肝移植動(dòng)物模型。2.研究補(bǔ)體C3a活性片段早期干預(yù)同種大鼠部分肝移植后移植肝的病理表現(xiàn)、肝功能、增殖細(xì)胞核抗原標(biāo)記指數(shù)(proliferating cell nuclear antigen labeling index，PCNA LI)和TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)變

2、化，探討補(bǔ)體C3a活性片段對(duì)大鼠肝部分移植后早期肝再生的影響。 方法：1.采用Kamada“二袖套法”，稍加改進(jìn)建立大鼠原位60％肝移植動(dòng)物模型，即供肝切除肝左葉及雙尾葉，采用端端連續(xù)縫合法吻合肝上下腔靜脈，用雙袖套法吻合門(mén)靜脈及肝下下腔靜脈，肝動(dòng)脈結(jié)扎不予重建，膽管用內(nèi)支架法完成膽道重建。術(shù)后觀察生存質(zhì)量，總結(jié)手術(shù)技巧、經(jīng)驗(yàn)和方法，掌握成熟穩(wěn)定的大鼠肝部分移植動(dòng)物模型技術(shù)。2.采用上述方法建立Sprague-Dawley(SD

3、)到SD補(bǔ)體C3a活性片段實(shí)驗(yàn)組(A組)和SD到SD生理鹽水對(duì)照組(B組)部分肝移植動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后每6h腹腔注射補(bǔ)體C3a活性片段100ug，對(duì)照組給與等量的生理鹽水。每組正常存活大鼠24只，于術(shù)后12h、24h、48h和72h分別活殺6只取外周血漿及肝臟組織標(biāo)本；光鏡觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)改變；全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)外周血漿ALT；免疫組織化學(xué)檢測(cè)PCNA、Real Time-PCR檢測(cè)TNF-α和IL-6 mRNA的表達(dá)。

4、結(jié)果：1.通過(guò)手術(shù)操作訓(xùn)練，建立起穩(wěn)定的大鼠部分肝移植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。A和B兩組間手術(shù)時(shí)間、供肝冷保存時(shí)間、受體無(wú)肝期時(shí)間相比較無(wú)顯著差異。2.血清ALT檢測(cè)：A、B組間相比較，A組血清ALT術(shù)后48h和72h分別為216.7±24.6U/L和143.4±18.7U/L；B組術(shù)后48h和72h血清ALT分別為466.6±32.8U/L和321.6±28.6U/L，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；其余時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)顯著性差異。3.肝細(xì)胞P

5、CNALI的變化：兩組中PCNA LI的高峰均出現(xiàn)在術(shù)后48h，A組和B組的峰值分別為423.8±54.6和286.5±32.4；A組術(shù)后24h和48h的：PCNA LI分別為296.8±36.2和423.8±54.6，B組術(shù)后24h和48h的PCNA LI分別為172.4±28.5和286.5±32.4，A組術(shù)后24h和48h的PCNA LI均明顯高于B組術(shù)后同一時(shí)間點(diǎn)的PCNA LI，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而其余觀

6、察時(shí)間點(diǎn)的PCNA LI則無(wú)顯著性差異。4.肝組織TNF-α和IL-6 mRNA表達(dá)的變化：A、B兩組TNF-α,和IL-6 mRNA表達(dá)的高峰均出現(xiàn)在術(shù)后第48h，術(shù)后72h出現(xiàn)下降趨勢(shì)。A組與B組在術(shù)后24h和48h比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論：1.大鼠部分肝移植術(shù)后早期應(yīng)用補(bǔ)體C3a話性片段可促進(jìn)肝細(xì)胞的再生，降低血清ALT，起到保護(hù)肝功能的作用。2.大鼠部分肝移植術(shù)后早期應(yīng)用補(bǔ)體C3a活性片段促進(jìn)肝細(xì)