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文檔簡介
1、目的:白血病是血液系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,目前臨床上主要通過化療、骨髓移植等手段使部分患者達到完全緩解,但多數(shù)患者終因耐藥、復發(fā)等情況導致治療失敗。因此,要進一步延長白血病治療后緩解期和消滅微量殘存的白血病細胞,免疫治療是重要的可選方法之一。
IL-23(interleukin-23)是Oppmann等在2000年報告的一個新的異二聚體細胞因子,由p19和IL-12p40兩個亞基組成。IL-23可促進記憶性T細胞增殖,誘導活化
2、的T細胞和樹突狀細胞(DC)產(chǎn)生干擾素-γ(IFN-γ)和白細胞介素12(IL-12)等細胞因子,與自身免疫及炎癥反應性疾病密切相關,且具有抗腫瘤和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用,有望成為新的免疫治療因子。IL-23誘導T細胞產(chǎn)生IFN-γ較少,而不會在臨床應用時產(chǎn)生嚴重的毒副反應。因此,IL-23有可能成為腫瘤治療中更為安全的選擇。IL-2是白細胞介素家族中的重要成員之一,它能促進T細胞增殖,刺激細胞毒性T淋巴細胞(CTL)的增殖與分化,增強自然
3、殺傷(NK)細胞的細胞毒活性。研究證實,IL-2在體內(nèi)具有顯著的抗腫瘤作用,但需依賴于外源性大劑量IL-2的持續(xù)輸注并伴有嚴重的毒副作用。為減輕其毒副作用,近年來有不少關于小劑量IL-2與其他細胞因子聯(lián)合誘導外周血單個核細胞(PBMC)對腫瘤細胞殺傷效應的報道,且多呈協(xié)同增強效應。本研究主要目的是探討IL-23單獨或聯(lián)合應用IL-2誘導人PBMC對白血病細胞的殺傷效應及作用機制,希望為白血病的免疫治療提供新的線索,以進一步提高臨床惡性血
4、液病的治療效果。
方法:Ficoll密度梯度離心法分離正常人PBMC。IL-23(50ng/mL),IL-2(100IU/mL)單獨或聯(lián)合體外誘導PBMC72h,與白血病細胞株K562共同培養(yǎng),采用CCK-8法測定不同時間誘導后的PBMC對K562細胞的殺傷效應;采用ELISA方法檢測殺傷活性最大時細胞培養(yǎng)液中IFN-γ的水平;應用RQ-PCR法檢測誘導后PBMC的穿孔素、顆粒酶B的表達水平變化。所得結果運用SPSS13.
5、0統(tǒng)計軟件包處理,以α=0.05為顯著性檢驗水準。
結果:
1.IL-23單獨或聯(lián)合IL-2體外誘導正常人PBMC后對白血病K562細胞株殺傷活性的影響:IL-23(50ng/mL)處理后的PBMC,作用于K562細胞24h、48h、72h后殺傷率分別為:(15.12±0.58)%、(18.71±1.07)%、(24.36±1.59)%;IL-2(100IU/mL)作用于K562細胞24h、48h、72h后殺
6、傷率分別為:(15.64±0.60)%、(19.75±0.96)%、(25.34±1.71)%;IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)作用于K562細胞24h、48h、72h后殺傷率分別為:(22.58±0.67)%、(27.84±1.31)%、(34.4±1.24)%。統(tǒng)計學分析顯示,IL-23(50ng/mL)、IL-2(100IU/mL)及兩者聯(lián)合作用后的PBMC均對K562細胞有殺傷活性,隨著時間延長,殺傷率
7、明顯增加,各個時間點比較,有顯著性差異。IL-23能促進PBMC對K562細胞的殺傷活性,IL-23與IL-2聯(lián)合具有協(xié)同作用,可進一步增強殺傷活性,而且在作用于PBMC72h時殺傷活性最高。
2.IL-23單獨或聯(lián)合IL-2作用于正常人PBMC后對培養(yǎng)液中IFN-γ表達的影響:IL-23(50ng/mL)、IL-2(1001U/mL)及IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)分別作用于PBMC72h后,
8、檢測細胞培養(yǎng)液上清中IFN-γ的含量水平為:156.08±12.40、191.68±16.92、615.83±21.39,對照組為44.39±5.90。統(tǒng)計學分析顯示,各細胞因子組培養(yǎng)液中分泌IFN-γ水平均顯著高于未加細胞因子的空白對照組,其中以IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)組誘導PBMC表達IFN-γ的水平最高,與其它兩組比較,有顯著性差異。IL-23(50ng/mL)組誘導PBMC表達IFN-γ的水平與
9、IL-2(100IU/mL)組相比無統(tǒng)計學差異。
3.IL-23單獨或聯(lián)合IL-2作用于正常人PBMC后對穿孔素mRNA表達水平的影響:RQ-PCR檢測結果顯示,IL-23(50ng/mL)、IL-2(100IU/mL)及IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)分別作用于PBMC72h后,穿孔素的RQ值為:1.39±0.23、1.54±0.16、2.32±0.22,空白對照組為0.51±0.12。統(tǒng)計學顯
10、示,各細胞因子組PBMC的穿孔素mRNA的表達量均較對照組明顯增加,且IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)組的穿孔素mRNA表達量顯著高于其他組,IL-2(100IU/mL)組與IL-23(50ng/mL)組穿孔素mRNA的表達量比較無統(tǒng)計學差異。
4.IL-23單獨或聯(lián)合IL-2作用于正常人PBMC后對顆粒酶BmRNA表達水平的影響:RQ-PCR檢測結果顯示,IL-23(50ng/mL)、IL-2(
11、100IU/mL)及IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)分別作用于PBMC72h后,顆粒酶B的RQ值為:1.57±0.33、1.74±0.11、2.298±0.21,空白對照組為0.38±0.12。統(tǒng)計學顯示,各細胞因子組PBMC的顆粒酶BmRNA的表達量均較對照組明顯增加,且IL-23(50ng/mL)+IL-2(100IU/mL)組的顆粒酶BmRNA表達量顯著高于其他組,IL-2(100IU/mL)組與IL-2
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