動(dòng)物組織中萊克多巴胺殘留免疫檢測(cè)方法研究.pdf

1、本文以butane-1,4-diol diglycidyl ether作為連接臂,采用直接偶聯(lián)法,將半抗原萊克多巴胺與載體蛋白.牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)作為免疫抗原RAC-BSA進(jìn)行動(dòng)物免疫,與辢根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)得酶標(biāo)抗原RAC-HRP,作為直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫的酶標(biāo)記物；采用琥珀酸酐.混合酸酐法合成RAC-OVA,作為間接競(jìng)爭(zhēng)的包被抗原進(jìn)行抗血清效價(jià)測(cè)定。
　　 通過特定的免疫程序,免疫日本大耳白兔,獲得了親合性很高的

2、抗萊克多巴胺的抗血清,經(jīng)免疫親和層析法純化后獲得多克隆抗體,建立直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法。結(jié)果表明,此方法具有較高的靈敏度,IC50為0.9ng/mL,檢出限(IC15)為0.15 ng/mL；除了與多巴酚丁胺的交叉反應(yīng)為7.5％外,與克倫特羅、沙丁胺醇、特步他林、異丙腎上腺素、和異奎胍均無(wú)交叉現(xiàn)象,說明抗體特異性較高。選擇四種動(dòng)物樣品進(jìn)行基質(zhì)影響消除的研究,結(jié)果表明,采用PBS進(jìn)行5倍提取后,便可消除基質(zhì)影響,不需要有機(jī)溶劑和其他凈化

3、步驟,樣品中的檢出限達(dá)0.5 μg/kg；在樣品中添加三個(gè)水平的萊克多巴胺濃度,回收率達(dá)60％以上,為萊克多巴胺快速檢測(cè)試劑盒的研制奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 為開發(fā)快速檢測(cè)試劑盒,論文進(jìn)一步驗(yàn)證了抗體和酶標(biāo)抗原穩(wěn)定性及貯存條件。研究表明,抗體和酶標(biāo)在4℃條件下儲(chǔ)存半年以上而不影響檢測(cè)性能,有利于萊克多巴胺試劑盒的推廣和應(yīng)用,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)萊克多巴胺的有效監(jiān)控。
　　 在建立了萊克多巴胺酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上,還研究建立了萊克