DLL4-Notch1信號(hào)通路對(duì)白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的:本研究將Notch的配體DLL4基因轉(zhuǎn)染慢性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞,旨在探討外源性DLL4基因是否活化K562細(xì)胞內(nèi)Notch1信號(hào)通路,及對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　方法:試驗(yàn)分組:①正常對(duì)照組(未轉(zhuǎn)染組);②陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pBudCE4.1組);③實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pBudCE4.1-DLL4組)。采用脂質(zhì)體Lipofectinamine2000介導(dǎo)將各組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞:①分別用RT-PCR和We

2、sternblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時(shí)后各組細(xì)胞DLL4的mRNA及蛋白表達(dá),同時(shí)用細(xì)胞免疫熒光化學(xué)法進(jìn)一步證明DLL4蛋白是否在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)高表達(dá);②分別用RT-PCR和Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時(shí)后各組細(xì)胞Notch1受體胞內(nèi)區(qū)(NICD)、下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表達(dá);③用CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時(shí)后各組細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果:用脂質(zhì)體200

3、0介導(dǎo)各組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞:①RT-PCR和Westernblot結(jié)果示轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時(shí)后實(shí)驗(yàn)組DLL4的mRNA及蛋白表達(dá)量比兩個(gè)對(duì)照組明顯增多(P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義),細(xì)胞免疫熒光化學(xué)法進(jìn)一步證明DLL4蛋白主要在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)高表達(dá),證明質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染K562細(xì)胞;②RT-PCR和Westernblot結(jié)果示轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時(shí)后實(shí)驗(yàn)組Notch1受體胞內(nèi)區(qū)(NICD)、下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表達(dá)量比兩