免疫治療結(jié)束后腫瘤微環(huán)境中的IFN-γ撤除通過(guò)增強(qiáng)整合素αvβ3信號(hào)導(dǎo)致有潛力的腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文免疫治療結(jié)束后腫瘤微環(huán)境中的IFNγ撤除通過(guò)增強(qiáng)整合素αvβ3信號(hào)導(dǎo)致有潛力的腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移姓名：龔偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：馮作化張桂梅20090501華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士畢業(yè)論文2（CH50多肽）補(bǔ)救，達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲的作用。本實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容主要分為以下五部分：第一部分：研究腫瘤免疫治療后殘存腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。免疫治療并不能完全清除腫瘤細(xì)胞，而且我們不清楚殘

2、存腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力又發(fā)生什么改變？體內(nèi)轉(zhuǎn)染41BBLsPD1質(zhì)粒，RTPCR和Westernblot結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染48h后，小鼠肌肉注射部位均有41BBL和sPD1mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。體內(nèi)轉(zhuǎn)染p41BBLpsPD1質(zhì)粒進(jìn)行基因治療，能夠顯著抑制小鼠腿部腫瘤生長(zhǎng)，腫瘤生長(zhǎng)速率顯著低于空白對(duì)照組和pcDNA3.1組。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)p41BBLpsPD1質(zhì)粒治療的腫瘤組織塊其肝移植瘤明顯大于空白對(duì)照組和pcDNA3.1組的肝移植瘤

3、，肝表面可見(jiàn)較多的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。第二部分：研究免疫治療結(jié)束后殘存的腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化及其影響因素。IFNγ是腫瘤免疫治療中非常重要的細(xì)胞因子，IFNγ具有明顯抑制小鼠腿部腫瘤生長(zhǎng)的作用。采用IFNγELISA試劑盒檢測(cè)，結(jié)果顯示p41BBLpsPD1組治療結(jié)束時(shí)和治療結(jié)束后14天IFNγ濃度降低10倍。IFNγ治療后的移植瘤停用IFNγ治療，肝移植瘤生長(zhǎng)速度加快，瘤體明顯增大，而且肝表面可見(jiàn)多個(gè)轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。體外經(jīng)IFNγ處理的B16細(xì)

4、胞和H22細(xì)胞分別接種于C57BL6和BALBc小鼠的肝臟，16天后解剖小鼠，IFNγ撤除組（接種IFNγ處理的瘤細(xì)胞后，動(dòng)物不再進(jìn)行免疫治療組），腫瘤生長(zhǎng)明顯增強(qiáng)，瘤體明顯增大。第三部分：研究旨在觀察IFNγ處理和撤除后腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的改變，并探討引起這些生物學(xué)特性改變可能的機(jī)制。IFNγ處理后濃度降低s速度與細(xì)胞體外增殖速度成正比。而且IFNγ撤除后B16細(xì)胞在抵抗MMC誘導(dǎo)凋亡、粘附以及恢復(fù)粘附能力、侵襲能力等方面均明顯高于對(duì)

5、照組細(xì)胞。同時(shí)應(yīng)用RealTimePCR、westernblot檢測(cè)相關(guān)基因變化情況：與增殖、抵抗凋亡正相關(guān)的基因如cMyc、Bcl2和BclxL表達(dá)均明顯高于對(duì)照組細(xì)胞；而負(fù)相關(guān)基因如p21WAF1、p27Kip和Bax均明顯低于對(duì)照組細(xì)胞；Westernblot檢測(cè)ERK12、JNK磷酸化，IFNγ撤除后B16細(xì)胞的ERK12、JNK磷酸化水平增高。尾靜脈接種IFNγ處理B16細(xì)胞于小鼠，5、24小時(shí)小鼠肺部腫瘤熒光數(shù)目明顯高于對(duì)照