免疫豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒分離株的生物學(xué)特性分析.pdf

1、豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的一種豬傳染病，其臨床癥狀主要為妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)和仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。20世紀(jì)90年代我國(guó)采取疫苗預(yù)防接種而有效控制了該病的流行，但自2011年下半年以來(lái)，在我國(guó)多個(gè)省份用Bartha-K61疫苗免疫接種的豬場(chǎng)相繼發(fā)生了豬偽狂犬病。本實(shí)驗(yàn)室從河北省沙河市和陜西省漢中市幾個(gè)疫苗免疫豬場(chǎng)發(fā)生疑似豬偽狂犬病的

2、病豬分離鑒定出了3株P(guān)RV野毒株，分別命名為HB-SH1-2015、HB-SH2-2015和SX-HZ-2015分離株。本研究對(duì)3個(gè)PRV分離株進(jìn)行了細(xì)胞培養(yǎng)、PRVTCID50測(cè)定、家兔感染試驗(yàn)、家兔腦組織和肺組織中病毒載量的測(cè)定以及gE基因的核苷酸序列分析，獲得了以下結(jié)果。
　　(1)3個(gè)PRV分離株接毒PK-15細(xì)胞后24h出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變(CPE)，即24h部分細(xì)胞出現(xiàn)圓縮和散在的灶狀，48h細(xì)胞出現(xiàn)圓縮和聚集，72h細(xì)

3、胞出現(xiàn)破碎和死亡;病毒滴度在HB-SH1-2015為10-112857TCID50/100μL，HB-SH2-2015為10-13.9027TCID50/100μL,SX-HZ-2015為10-12.2877TCID50/100μL。
　　(2)家兔感染試驗(yàn)結(jié)果顯示，3個(gè)PRV分離株均可使家兔表現(xiàn)出典型的偽狂犬病癥狀，即精神沉郁，食欲下降，體溫升高，部分家兔出現(xiàn)咬毛啃食現(xiàn)象，之后10h內(nèi)出現(xiàn)體力衰竭、角弓反張、痙攣等癥狀，全部家兔

4、相繼死亡。病理剖檢結(jié)果顯示，3個(gè)試驗(yàn)組家兔均出現(xiàn)了典型的PRV病變，肝臟腫大、邊緣壞死，肺臟淤血、水腫;脾臟淤血腫大，有壞死灶。real-time PCR檢測(cè)感染家兔腦組織和肺組織病毒載量的結(jié)果顯示，腦組織中HB-SH1-2015分離株和HB-SH2-2015分離株病毒量分別為7.5×105copies/g和6.9×105copies/g，無(wú)顯著差異(P＞0.05);而SX-HZ-2015分離株的病毒量為1.2×106copies/g，

5、顯著高于河北的2個(gè)分離株(P＜0.05);肺組織中HB-SH1-2015分離株和HB-SH2-2015分離株的病毒量分別為3.8×1010copies/g和3.4×1010copies/g，無(wú)顯著差異(P＞0.05);而SX-HZ-2015分離株的病毒量為7.6×1010copies/g，極顯著高于河北的2個(gè)分離株(P＜0.01)。提示SX-HZ-2015分離株對(duì)家兔腦組織和肺組織的侵染性明顯強(qiáng)于HB-SH1-2015分離株和HB-SH

6、2-2015分離株。
　　(3)PRV gE基因核苷酸序列比結(jié)果顯示，HB-SH1-2015分離株與HB-SH2-2015分離株gE基因核苷酸同源性為99.9％，而SX-HZ-2015分離株與它們的同源性為99.3％，進(jìn)行g(shù)E基因的突變位點(diǎn)比對(duì)，發(fā)現(xiàn)SX-HZ-2015分離株相對(duì)于HB-SH1-2015分離株和HB-SH2-2015分離株存在部分位點(diǎn)的缺失和變異;HB-SH1-2015分離株和HB-SH2-2015毒株與2012年