軸突導(dǎo)向因子Slit及其受體Robo在損傷周圍神經(jīng)的表達(dá)及其功能.pdf

1、Slit為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中線膠質(zhì)細(xì)胞所分泌的一類可擴散的大分子蛋白質(zhì)，具有排斥發(fā)育中的神經(jīng)生長錐，誘導(dǎo)細(xì)胞遷移，促進(jìn)軸突生長與分支形成的作用。Robo屬于細(xì)胞粘附分子(CAMs)免疫球蛋白(Ig)超家族成員，為跨膜受體蛋白，介導(dǎo)Slit對生長錐和神經(jīng)元的排斥作用，參與調(diào)控發(fā)育中的中樞神經(jīng)軸突定向，同時Robo也具有同親和附著與異親和附著特性，可促進(jìn)軸突生長和調(diào)控神經(jīng)纖維束化、定位。有關(guān)Slit及Robo在成年動物周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的分布與功能

2、報道極少。同時，周圍神經(jīng)再生特異性(再生軸突生長定向)的細(xì)胞與分子機制尚不明確。 目的：研究Slit、Robo基因和蛋白質(zhì)在成年大鼠脊髓、脊神經(jīng)節(jié)(DRG)、坐骨神經(jīng)(SN)的表達(dá)差異及損傷后的變化，探討它們在神經(jīng)損傷再生過程中的作用，揭示Slit、Robo的生理功能和周圍神經(jīng)再生特異的分子機制。 材料與方法：SD大鼠坐骨神經(jīng)切斷或脊神經(jīng)后根切斷后，存活3、7、14、2l、28 d，取其相應(yīng)節(jié)段脊髓、后根、DRG和損傷神

3、經(jīng)的遠(yuǎn)、近端；利用RT-PCR、原位雜交、免疫組織化學(xué)等方法檢測Slitl、Slit2、Rob01、Rob02在上述組織中的表達(dá)。進(jìn)而利用坐骨神經(jīng)壓榨(SNC)和切斷后立即縫合(SNS)模型，將可溶性Robo1-Fc融合蛋白注入到損傷或縫合部位，形成坐骨神經(jīng)壓榨實驗組(SNCE)和坐骨神經(jīng)縫合實驗組(SNSE)；等量Fc蛋白代替Robol-Fc注入上述模型形成兩對照組(SNCC和SNSC)。術(shù)后不同時間點進(jìn)行再生纖維半薄切片，甲苯胺藍(lán)染

4、色，步態(tài)分析。從組織學(xué)和神經(jīng)肌肉功能等兩方面評價Robo對神經(jīng)纖維再生速率和生長方向的影響。 結(jié)果： 1、正常成年大鼠脊髓前角運動神經(jīng)元和后角與感覺有關(guān)的神經(jīng)元表達(dá)Robo2；前角運動神經(jīng)元表達(dá)Slit2；坐骨神經(jīng)切斷和后根切斷對脊髓的表達(dá)影響不明顯。 2、正常DRG感覺神經(jīng)元表達(dá)Robo1、Robo2和Slitl、Slit2；Robo2的表達(dá)以小直徑神經(jīng)元為主；Robo1和Robo2在DRG內(nèi)無共表達(dá)；DRG膠

5、質(zhì)細(xì)胞表達(dá)Slitl和Slit2，衛(wèi)星細(xì)胞只表達(dá)Slitl。坐骨神經(jīng)切斷后，DRG內(nèi)Robo1、Robo2及Slit1、Slit2的表達(dá)早期增加，7-14 d達(dá)高峰，之后有所下降，但維持較對側(cè)高的表達(dá)水平，至21-28 d恢復(fù)到對側(cè)水平；大直徑神經(jīng)元Robo2的表達(dá)增強；Robpo1和Robo2在損傷DRG內(nèi)仍無共表達(dá)。后根切斷后對上述各種因子在DRG內(nèi)表達(dá)影響不明顯。 3、正常坐骨神經(jīng)SCs表達(dá)Slit1和Slit2；坐骨神經(jīng)

6、切斷后，損傷遠(yuǎn)側(cè)端華勒氏變性組織及近側(cè)端逆性變性組織表達(dá)S1itl、Slit2；殘端神經(jīng)瘤瘤體組織中心部分Slitl、Slit2的表達(dá)較弱，而周邊部分表達(dá)較強。4、Robo1-Fc融合蛋白局部應(yīng)用于坐骨神經(jīng)損傷再生模型，術(shù)后21d再生纖維計數(shù)顯示兩實驗組均不及對照組；至術(shù)后42d再生纖維計數(shù)，兩實驗組與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異；術(shù)后14、21 d,SNCE組中間趾寬因子(ITF)及坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(SFI)不及SNCC;術(shù)后35、42 d,足

7、長因子(PLF)、趾寬因子(TSF)、ITF、SFI等指標(biāo)與SNCC比較均無差異。術(shù)后14、21 d,SNS組上述各指標(biāo)與SNSC組比較,無統(tǒng)計學(xué)差異;而在術(shù)后35、42 d,上述指標(biāo)均不及SNSC組。 結(jié)論:1.Slit和:Robo在成年大鼠脊髓、DRG及坐骨神經(jīng)的表達(dá)呈現(xiàn)組織和細(xì)胞特異性。 2.神經(jīng)周圍突切斷能上調(diào)DRG內(nèi)Slit和Robo的表達(dá),而中樞突切斷對此影響較小。 3.Slitl和Slit2在正常周