EGFR信號通路調(diào)控人肝細(xì)胞癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制的研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌(human hepatocellular carcinoma，HCC)是最常見的惡性腫瘤之一，全球發(fā)病率還在不斷上升，我國每年約有三十萬人死于此病，年死亡率居世界第一位。表皮生長因子受體(epidermalgrowch factor receptor，EGFR)是由C-erbBl基因編碼的具有酪氨酸蛋白激酶(receptor tyrosine kinase，RTK)活性的跨膜受體，EGFR由胞外配體結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)

2、3部分組成，胞內(nèi)區(qū)是其發(fā)揮酪氨酸激酶活性、介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵部位。EGRF普遍表達(dá)于人體的表皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞，臨床研究顯示，在許多上皮來源的腫瘤細(xì)胞，如乳腺癌、非小細(xì)胞性肺癌、腎癌、卵巢癌和結(jié)腸癌中都存在EGFR的過表達(dá)，但是，EGFR在HCC發(fā)病進(jìn)程中的作用尚不十分明確，還有待進(jìn)一步證實。近年有研究報道，EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在正常組織中多呈關(guān)閉狀態(tài)，而在腫瘤組織中被激活開放，其下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要包括Ras-ERK/MAPK，PI3K

3、/AKT和JAK/STAT。其中Ras-ERtC/MAPK途徑與增殖的關(guān)系較為密切。本實驗采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法觀察EGFR在肝癌組織中的表達(dá)情況；應(yīng)用EGFR激動劑和抑制劑處理人肝細(xì)胞癌細(xì)胞HuH7，觀察EGFR活性改變對細(xì)胞增殖的影響，初步探討HCC中的EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其影響腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制。 本文研究了HCC中表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGF

4、R)的表達(dá)及HuH7細(xì)胞內(nèi)EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，探討EGFR在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖中的作用。 研究方法：用常規(guī)方法培養(yǎng)人肝細(xì)胞癌細(xì)胞HUH7；用免疫組織化學(xué)實驗檢測HCC組織 EGFR的表達(dá)；用外源性EGF和AG1478處理人肝細(xì)胞癌細(xì)胞HUH7；用Westem Blot實驗檢測人肝細(xì)胞癌細(xì)胞HuH7中EGFR、p-EGFR、p-ERK白表達(dá)；用WST實驗檢測細(xì)胞增長率。 研究結(jié)果：1.在17例HCC患者癌組織中，EGFR的

5、陽性表達(dá)率為100％(17/17)；人肝細(xì)胞癌細(xì)胞HuH7中EGFR的表達(dá)明顯高于正常肝細(xì)胞HL-7702。2.外源性EGF(10μg/L)處理后，ERK和EGFR的磷酸化水平明顯提高，同時細(xì)胞生長率提高9.2％，而EGFR斗寺異性抑制劑AG1478(20μol/L)能明顯阻斷EGF誘導(dǎo)的ERK、EGFR蛋白的磷酸化激活和促細(xì)胞增殖作用。 研究結(jié)論：HCC中，EGFR高表達(dá)，EGFR的激活主要通過受體磷酸化完成，活化的p-EGF