ERK1-2信號(hào)通路在NaAsO2誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞凋亡過程中的作用.pdf

1、目的：探討不同濃度亞砷酸鈉（NaAsO2）對(duì)人正常肝細(xì)胞（L-02）細(xì)胞生長和凋亡的影響，并研究細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular-signal-regulated kinase，ERK)信號(hào)通路在 NaAsO2誘導(dǎo) L-02細(xì)胞凋亡中的作用，為探討 ERK1/2信號(hào)傳導(dǎo)通路在砷致肝損傷機(jī)制中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1、不同濃度（0、50、100、150μmol/L）NaAsO2作用L-02肝細(xì)胞24h后，采用

2、四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測 L-02肝細(xì)胞存活率；流式細(xì)胞術(shù)檢測 L-02肝細(xì)胞細(xì)胞凋亡率；免疫印跡（WB）技術(shù)檢測L-02肝細(xì)胞中ERK1/2、p-ERK1/2和BaX、Bcl-2、Cyto-c、Caspase-3蛋白表達(dá)水平的差異。2、ERK1/2特異性抑制劑（PD98059）預(yù)處理L-02肝細(xì)胞30min后，再用不同濃度NaAsO2作用L-02肝細(xì)胞24h后，MTT法檢測細(xì)胞存活率、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率，WB檢測ERK1/

3、2、p-ERK1/2和BaX、Bcl-2、Cyto-c、Caspase-3蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、NaAsO2對(duì) L-02肝細(xì)胞生長和凋亡的影響：L-02肝細(xì)胞的存活率隨 NaAsO2濃度的增加而降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；L-02肝細(xì)胞凋亡率隨NaAsO2濃度的增加而升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　2、NaAsO2對(duì)L-02肝細(xì)胞中ERK1/2、ERK1/2磷酸化水平的影響

4、：ERK1、ERK2蛋白的表達(dá)隨NaAsO2濃度的增加而升高，100、150μmol/L NaAsO2組的表達(dá)明顯增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ERK1、ERK2磷酸化水平隨 NaAsO2濃度的增加而表達(dá)升高，100、150μmol/L NaAsO2組表達(dá)顯著增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　3、NaAsO2對(duì)L-02肝細(xì)胞中BaX、Bcl-2、Cyto-c、Caspase-3蛋白表達(dá)的影響：BaX蛋白的

5、表達(dá)隨NaAsO2濃度的增加而升高，150μmol/L NaAsO2組表達(dá)最強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Bcl-2蛋白的表達(dá)隨NaAsO2濃度的增加而降低，150μmol/L NaAsO2組表達(dá)明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；BaX/Bcl-2比值隨劑量的增加而升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Cyto-c、Caspase-3蛋白的表達(dá)隨NaAsO2劑量的增加而升高，100、150μmol/L NaAs

6、O2組表達(dá)最強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4、ERK1/2抑制劑PD98059對(duì)NaAsO2所致L-02肝細(xì)胞的影響：ERK1/2抑制劑可降低NaAsO2對(duì)L-02肝細(xì)胞的生長抑制作用，細(xì)胞存活率較拮抗前升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；細(xì)胞凋亡率較拮抗前降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ERK1、ERK2蛋白的表達(dá)較拮抗前升高，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；ERK1、ERK2磷酸化水平的表達(dá)較拮抗前下降，1

7、00μmol/L NaAsO2組的ERK1磷酸化水平表達(dá)明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，150μmol/L NaAsO2組的ERK2磷酸化水平表達(dá)明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；BaX、Bcl-2蛋白的表達(dá)較拮抗前明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但BaX/Bcl-2比值較拮抗前降低，150μmol/L NaAsO2組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Cyto-c、Caspase-3蛋

8、白的表達(dá)較拮抗前下降，150μmol/L NaAsO2組表達(dá)明顯減弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1. NaAsO2可抑制 L-02肝細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生；NaAsO2誘導(dǎo) L-02肝細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制可能與改變ERK1/2蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)磷酸化ERK1/2蛋白表達(dá)水平，繼而改變BaX、Bcl-2、Cyto-c和Caspase-3等相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。
　　2. NaAsO2抑制L-