草魚(yú)白細(xì)胞介素-2基因克隆、序列分析及其在原核細(xì)胞中表達(dá)的研究.pdf

1、白細(xì)胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）是機(jī)體復(fù)雜免疫網(wǎng)絡(luò)中起調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵淋巴因子之一,在人和其他高等脊椎動(dòng)物中已有廣泛的研究與應(yīng)用,但對(duì)低等脊椎動(dòng)物的IL-2仍知之甚少,魚(yú)類(lèi)在進(jìn)化上處于連結(jié)低等無(wú)脊椎動(dòng)物和高等脊椎動(dòng)物的關(guān)鍵地位,開(kāi)展魚(yú)類(lèi)IL-2的研究,對(duì)了解IL-2的分子起源與進(jìn)化具有重要意義.該研究用ConA刺激體外培養(yǎng)的草魚(yú)頭腎白細(xì)胞,MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)體外誘導(dǎo)的草魚(yú)白細(xì)胞培養(yǎng)上清液具有促進(jìn)草魚(yú)頭腎淋巴母細(xì)胞增殖的

2、作用,觀察到了草魚(yú)IL-2活性.在此基礎(chǔ)上,開(kāi)展了草魚(yú)IL-2 cDNA基因克隆、序列分析和原核表達(dá)研究.將克隆到pUCm-T質(zhì)粒上的草魚(yú)IL-2 cDNA基因用NcoI和BamHI切下,連接到表達(dá)質(zhì)粒pET28b上,篩選得到的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli.BL21/DE3,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),做SDS-PAGE分析,發(fā)現(xiàn)在21kD處有特異性的表達(dá)產(chǎn)物條帶,分子量與預(yù)期的重組IL-2（包括部分His等載體序列）分子量大小一致,表明草魚(yú)IL-