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文檔簡介
1、目的:通過觀察癌痛消方對移植性肝癌大鼠血管生成擬態(tài)的干預,探討癌痛消方對肝癌血管生成抑制劑耐藥的影響。
方法:本實驗采用walker-256細胞株肝內(nèi)直接注射法建立60只雄性SD大鼠移植性肝癌模型,同時正常飼養(yǎng)10只正常大鼠,與模型組進行同期平行對照。造模第7天隨機抽取10只大鼠,處死取其肝臟組織,觀察病理改變,證實造模成功。隨機抽取10只作為模型空白對照組,不進行任何干預,與治療組進行對照。其余40只大鼠隨機分為4組:重組人
2、血管內(nèi)皮抑制素(恩度)組、癌痛消方組、重組人血管內(nèi)皮抑制素+癌痛消方組、陰性對照組,每組各10只。于造模后第8天起重組人血管內(nèi)皮抑制素組給予重組人血管內(nèi)皮抑制素(按0.75mg·kg-1劑量)皮下注射,陰性對照組予等體積生理鹽水皮下注射,癌痛消方組給予癌痛消方(以人體等效劑量63mg·kg-1·d-1按10ml·kg-1·d-1)灌胃給藥,重組人血管內(nèi)皮抑制素+癌痛消方組同時給予重組人血管內(nèi)皮抑制素皮下注射以及癌痛消方灌胃,每日1次,連
3、續(xù)給藥14天。于給藥后第15天處死所有大鼠,取出肝癌組織。采用透射電鏡觀察肝癌組織超微結(jié)構(gòu),PAS、CD31雙重染色以及CD31、CD105、Hepaocyte免疫組織化學染色檢測肝癌組織中血管生成擬態(tài)的表達,Western blot技術(shù)檢測基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9蛋白的表達。
結(jié)果:1、電鏡下可見重組人血管內(nèi)皮抑制素組部分肝細胞伸出細長突起,向周圍延伸,肝細胞彼此之間呈鑲嵌樣生長,形成環(huán)狀、網(wǎng)狀的毛細管腔樣結(jié)構(gòu)。
4、癌痛消方組、重組人血管內(nèi)皮抑制素+癌痛消方組則可見形成的管腔數(shù)量較少,細胞之間不能相互連接成網(wǎng)狀,很少聚集成簇。
2、CD31、PAS雙重染色顯示肝癌血管生成擬態(tài)(VM)的存在:鏡下可見一層PAS陽性物質(zhì)圍成的基底膜樣結(jié)構(gòu)分開腫瘤細胞與紅細胞,該管腔樣結(jié)構(gòu)CD31與CD105染色均為陰性,證明不是內(nèi)皮細胞。Hepatocyte染色為陽性,證實為肝癌細胞。
3、重組人血管內(nèi)皮抑制素組較多出現(xiàn)VM。而癌痛消方組、重組人血
5、管內(nèi)皮抑制素+癌痛消方組大鼠肝癌組織則無明顯網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)形成。
4、重組人血管內(nèi)皮抑制素組、癌痛消方組、重組人血管內(nèi)皮抑制素+癌痛消方組大鼠肝癌組織MMP-2、MMP-9蛋白的OD值與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),其中重組人血管內(nèi)皮抑制素+癌痛消方組與重組人血管內(nèi)皮抑制素組、癌痛消方組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),重組人血管內(nèi)皮抑制素組與癌痛消方組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),提示重組人血管內(nèi)皮抑制素組、
6、癌痛消方組、重組人血管內(nèi)皮抑制素+癌痛消方組均能降低大鼠肝癌組織中MMP-2、MMP-9蛋白的表達,且重組人血管內(nèi)皮抑制素+癌痛消方組降低MMP-2、MMP-9蛋白表達的療效優(yōu)于重組人血管內(nèi)皮抑制素組、癌痛消方組。
結(jié)論:1、證實了移植性肝癌大鼠肝癌組織中存在血管生成擬態(tài),其形成與肝癌血管生成抑制劑產(chǎn)生耐藥有一定的關(guān)系。
2、癌痛消方可干預移植性肝癌大鼠肝癌血管生成擬態(tài)的形成。
3、癌痛消方可下調(diào)移植性肝癌
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