參附注射液對HK-2細胞缺氧再復氧損傷的改善作用及機制.pdf

1、背景:隨著醫(yī)療技術的進步，許多組織、器官缺血后能在短時間內重新獲得血流灌注。然而有時這種血流再灌注卻加重器官的功能障礙和結構損傷，此現(xiàn)象稱為缺血再灌注損傷(IRI)。腎是富血流的器官，對IRI相當敏感。IRI是缺血性急性腎功能衰竭(ARF)的重要發(fā)病機制，在腎移植過程中，它是導致早期移植腎功能障礙，甚至急性排斥反應的重要因素。盡管近年來治療技術有了一定的發(fā)展，ARF仍然有較高的發(fā)病率和死亡率。因此，研究腎IRI的發(fā)病機制，尋求新的針對I

2、RI本身的防治方法具有重要意義。近年來研究證實，腎IRI是一個多因素、多途徑參與的復雜病理生理過程：腎組織經歷缺氧再復氧的打擊后，通過氧自由基的損傷作用、細胞內鈣超載、炎癥因子浸潤等途徑，導致毛細血管通透性增加、腎間質水腫以及急性腎小管壞死。因此有效的治療IRI的方法應從多方面來阻斷這種病理生理過程。參附注射液(SF)的主要有效成分為人參皂甙，臨床上已應用于治療心、腦、腸的缺血再灌注損傷。它可通過清除氧自由基、拮抗細胞內鈣超載、抑制炎癥

3、細胞浸潤等機制減輕IRI，保護臟器功能。目前對于參附注射液在腎IRI中的改善作用和機制的研究較少，其在腎臟作用的靶點和效應尚待進一步研究。 目的:采用人近端腎小管上皮細胞系HK-2細胞建立腎急性缺血再灌注損傷的體外模型，結合本實驗室已完成的動物實驗，進一步在細胞、分子水平探討參附注射液在腎IRI的改善作用及其機制，從而為參附注射液在腎臟病領域的廣泛應用提供實驗依據(jù)。 方法:實驗分5組：正常對照組、單純缺氧再復氧組(IRI

4、)、低濃度參附(1％)+IRI組、中濃度參附(2％)+IRI組、高濃度參附(5％)+IRI組。體外培養(yǎng)HK-2細胞，以雙氣道孵箱營造含1％O2、5％CO2的缺氧環(huán)境，細胞放回常規(guī)孵箱為復氧。觀察各組細胞在缺氧4h再復氧8h刺激下的反應。 1.用流式細胞儀PI染色法和TUNEL檢測細胞凋亡比例； 2.用激光共聚焦顯微鏡檢測經Fluo-3AM標記的細胞內鈣濃度； 3.用ELISA檢測細胞培養(yǎng)液中MCP-1的濃度。

5、 結果: 1.SF減少細胞在缺氧再復氧刺激后的凋亡率，并呈劑量依賴性，5％SF組凋亡率最低，并與單純IRI組有顯著差異。流式細胞術與TUNEL法檢測的凋亡率一致。 2.SF抑制缺氧再復氧刺激后的細胞內鈣超載，并呈劑量依賴性，5％SF組細胞內鈣熒光值最低，與單純IRI組相比有顯著差異。 3.HK-2細胞正常情況下分泌少量的MCP-1，在缺氧再復氧刺激下分泌量增加。SF有抑制腎小管上皮細胞分泌MCP-1的作用，但