尾加壓素Ⅱ激活Smad2-3誘導(dǎo)血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化.pdf

1、背景：
　　人類尾加壓素II（Urotensin II, UII）是由11個氨基酸殘基組成的縮血管活性肽，其受體為GRP14（UT receptor, UT）。UII及其受體廣泛表達于多種組織，尤其是心血管系統(tǒng)。UII具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，現(xiàn)已證明UII能夠強烈收縮動脈血管，促進血管平滑肌細胞和成纖維細胞增殖，促進細胞遷移，促進泡沫細胞形成等等。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，UII能夠促進血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化，提示它是一種新的促進血管纖

2、維化的活性肽。血管纖維化表現(xiàn)為血管壁細胞外基質(zhì)異常增多、過度沉積和基質(zhì)重塑，其中血管外膜成纖維細胞向肌成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化是啟動血管纖維化的核心，其標(biāo)志是表達α-平滑肌肌動蛋（smooth-α-actin，α-SM-actin）明顯上調(diào)。然而，UII促進血管纖維化的機制尚未闡明。
　　Smad信號系統(tǒng)激活在血管纖維化過程中發(fā)揮重要作用，該信號系統(tǒng)激活是TGF-β受體激活后的傳統(tǒng)途徑，然而進一步研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β家族并非唯一激活Sm

3、ad信號的分子，其它活性因子如血管緊張素II等亦可激活Smad信號系統(tǒng)，提示縮血管活性肽是激活Smad信號系統(tǒng)的重要活性因子。本工作在前期研究基礎(chǔ)上，提出UII可通過激活Smad信號系統(tǒng)促進血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化的假設(shè)。
　　目的：
　　在體外培養(yǎng)的血管外膜成纖維細胞上，研究UII激活Smad2/3信號分子的作用特征和受體調(diào)控機制，以論證Smad2/3激活介導(dǎo)UII刺激血管外膜成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化的作用，進一步揭示血管纖維

4、化發(fā)展、血管外膜參與纖維化和UII作用的新機制，為防止血管纖維化的進展提供新的策略和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.在體外培養(yǎng)的SD大鼠主動脈外膜成纖維細胞上，分別用不同濃度的UII（10-10-10-7mol/l）刺激不同時間，觀察UII對Smad2/3磷酸化表達的影響。為了探討其作用是否通過UII受體發(fā)揮作用，在研究UII作用時，提前30分加入UT阻斷劑SB710411，共同孵育至24小時。實驗結(jié)束時，采用蛋白免疫印跡試

5、驗（Western blotting）測定細胞中p-Smad2/3的表達；
　　2.采用RNA干擾技術(shù)，分別使Smad2和Smad3基因沉默，采用Western blotting來檢測血管外膜成纖維細胞中α-SM-actin的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1. UII以時間和濃度依賴的方式促進血管外膜成纖維細胞表達p-Smad2/3，采用10-8mol/l UII分別刺激成纖維細胞3、6、12、24小時后，細胞中p-Sm

6、ad2/3的蛋白表達量隨著刺激時間的延長而逐漸增加，分別較對照組高21.6％、68.1%、117.8%(P<0.01)、147.2%（P<0.001）。此外，UII尚可以濃度依賴方式刺激p-Smad2/3表達，10-10 mol/l、10-9 mol/l、10-8 mol/l和10-7 mol/l UII組分別較對照組高12.3%、24.4%、82.8%（P<0.05）和53.9%。
　　2. UII刺激p-Smad2/3表達的效

7、應(yīng)能被UII受體阻斷劑SB710411（10-6 mol/l）所抑制，抑制率達67.50%（P<0.01）。
　　3.通過RNA干擾使Smad2和Smad3基因分別沉默，可以減弱UII誘導(dǎo)的外膜成纖維細胞表達α-SM-actin， siRNA處理組分別較UII組降低75.06%（P<0.001）和80.26%（P<0.001）。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn) UII能夠以濃度和時間依賴的方式促進血管外膜成纖維細胞表達p-