MicroRNA-27a調(diào)控抗病毒天然免疫應(yīng)答及其機(jī)制研究.pdf

1、當(dāng)機(jī)體受到病毒感染時(shí)，免疫細(xì)胞將通過(guò)模式識(shí)別受體識(shí)別病毒成分并活化下游的信號(hào)通路，從而表達(dá)Ⅰ型干擾素(Interferon，IFN)和促炎癥細(xì)胞因子。其中，Ⅰ型干擾素在激發(fā)抗病毒免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵作用，并且其表達(dá)受機(jī)體精確調(diào)控，而病毒本身也能干預(yù)抗病毒信號(hào)通路，實(shí)現(xiàn)其對(duì)機(jī)體抗病毒天然免疫的逃逸進(jìn)而增強(qiáng)自身的復(fù)制。病毒干預(yù)和逃逸機(jī)體抗病毒天然免疫應(yīng)答的機(jī)制是天然免疫研究的重大科學(xué)問(wèn)題。此外，miRNA在天然免疫應(yīng)答的調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用，病

2、毒在miRNA層面與機(jī)體的相互作用和機(jī)制目前受廣泛關(guān)注。據(jù)此，本研究擬通過(guò)探求在病毒感染過(guò)程中胞內(nèi)表達(dá)改變的miRNA并進(jìn)一步研究其作用機(jī)制，以尋求病毒通過(guò)調(diào)控機(jī)體miRNA的表達(dá)進(jìn)而干預(yù)抗病毒天然免疫應(yīng)答和實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的分子機(jī)制。我們先期通過(guò)高通量miRNA芯片篩選，發(fā)現(xiàn)在RNA病毒VSV感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的過(guò)程中，miR-27a的表達(dá)顯著降低。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，miR-27a的表達(dá)受到IFN/JAK/STAT1信號(hào)通路的調(diào)控，并且依

3、賴于RUNX1蛋白。miR-27a的表達(dá)下調(diào)將顯著抑制病毒誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生進(jìn)而增強(qiáng)病毒自身的復(fù)制。在分子機(jī)制研究中，通過(guò)小鼠全基因組表達(dá)譜芯片發(fā)現(xiàn)，miR-27a能夠靶向作用于唾液酸凝集素受體Siglec1和TRIM家族的E3泛素化連接酶TRIM27，過(guò)表達(dá)miR-27a后能在mRNA和蛋白水平上降低Siglec1和TRIM27的表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Siglec1能與DAP12相互作用，進(jìn)而活化酪氨酸磷酸酶SHP2，活化的SHP2

4、能招募E3泛素化連接酶TRIM27后作用于TBK1，使TBK1上251位和372位的賴氨酸殘基發(fā)生K48位連接的泛素化修飾進(jìn)而促進(jìn)其在蛋白酶體中降解，最終導(dǎo)致負(fù)向調(diào)控Ⅰ型干擾素的表達(dá)。我們構(gòu)建了miR-27a-sponge的轉(zhuǎn)基因小鼠，在體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證miR-27a的功能，當(dāng)腹腔注射VSV后，與對(duì)照組相比，miR-27a-sponge小鼠血清中的IFN-β的表達(dá)量顯著降低，HE染色發(fā)現(xiàn)，小鼠肺臟中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)更明顯，肝、脾、肺中VSV病