Deguelin（魚(yú)藤素）對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3和DU145的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究Deguelin對(duì)于前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3和DU145是否具有抑制生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡作用。驗(yàn)證Deguelin是否對(duì)于TXT(泰素帝)及MIT(米托蒽醌)具有化療增敏作用。探討Deguelin在PC3和DU145細(xì)胞中可能的作用機(jī)制，希望為晚期前列腺癌患者提供一種新的治療選擇。 方法: CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)抑制曲線(xiàn)。為了評(píng)價(jià)Deguelin與TXT及MIT的聯(lián)合作用效果，根據(jù)金氏公式計(jì)算q值，q

2、=E(AB)/[EA+(1-EA)×EB]。其中E(AB)為兩藥合用的抑制率，EA和EB為兩藥單用的抑制率。q>1.15表示兩藥有協(xié)同作用，q=0.85～1.15表示兩藥作用相加， q<0.85表示兩藥互相拮抗。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)PI染色檢測(cè)用藥前后細(xì)胞周期變化。采用流式細(xì)胞術(shù)Annexin v和PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。Western-blot檢測(cè)Akt、MAPK及其磷酸化蛋白表達(dá)，探討藥物作用機(jī)制。 結(jié)果: 1．細(xì)胞毒試驗(yàn)

3、：10nmol/l-1μmol/l Deguelin對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3的生長(zhǎng)均有抑制作用，呈現(xiàn)明顯的時(shí)間、濃度依賴(lài)性。與陽(yáng)性對(duì)照Wortmanin(渥曼青霉素)相比，同樣為100nmol/l的Deguelin對(duì)PC3細(xì)胞的抑制作用更為明顯(P<0.01)。不同濃度的Deguelin和Wortmanin對(duì)DU145細(xì)胞均未見(jiàn)明顯的生長(zhǎng)抑制作用。在PC3細(xì)胞中聯(lián)合應(yīng)用Deguelin和TXT及Deguelin和MIT較單藥對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑

4、制作用明顯增強(qiáng)(P<0.01)。Deguelin和TXT聯(lián)合應(yīng)用時(shí)q值為1.173，兩藥有協(xié)同作用。Deguelin和MIT聯(lián)用時(shí)的q值為1.002，為疊加作用。在DU145細(xì)胞中Deguelin/TXT及Deguelin/MIT聯(lián)合應(yīng)用與單藥時(shí)細(xì)胞存活率無(wú)明顯改變(P>0.05)，q值分別為0.936和0.907，說(shuō)明其聯(lián)合應(yīng)用時(shí)均表現(xiàn)為疊加作用。 2．細(xì)胞周期檢測(cè)：Deguelin作用48小時(shí)后，PC3細(xì)胞呈現(xiàn)出明顯的G2/

5、M期阻滯現(xiàn)象，并且隨著藥物濃度的提高，阻滯于G2/M期的細(xì)胞比例相應(yīng)的上升。TXT10nmol/l作用48小時(shí)后，PC3細(xì)胞也呈現(xiàn)出明顯的G2/M期阻滯現(xiàn)象。Deguelin100nmol/l與TXT10nmol/l聯(lián)合作用48小時(shí)后則出現(xiàn)了明顯的S期阻滯現(xiàn)象。DU45細(xì)胞中Deguelin作用48小時(shí)后并未明顯改變細(xì)胞周期的分布。 3．細(xì)胞凋亡檢測(cè)：PC3細(xì)胞中，不同濃度的Deguelin作用72小時(shí)后均可引起凋亡，并且呈濃度

6、依賴(lài)性。與Wortmanin相比，同樣為100 nmol/l的Deguelin引起PC3細(xì)胞凋亡率要高于前者。PC3細(xì)胞中，TXT和MIT與Deguelin聯(lián)合用藥后的凋亡率明顯高于單獨(dú)用藥組(P<0.01)。在DU145細(xì)胞中，Wortmanin及Deguelin作用72小時(shí)后并未明顯改變細(xì)胞凋亡率，TXT單獨(dú)應(yīng)用及與Deguelin聯(lián)合應(yīng)用的凋亡率也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。 4．Western blot檢測(cè)蛋白的表達(dá)：在PC3及DU1

7、45細(xì)胞中，總AKT蛋白、p42/44MAPK及其磷酸化蛋白在藥物作用前后的表達(dá)水平未見(jiàn)差別。PC3細(xì)胞中pAKT蛋白呈現(xiàn)持續(xù)高表達(dá)狀態(tài)，其表達(dá)在Wortmanin100nmol/l及Deguelin100nmol/l作用48小時(shí)后明顯降低，其中Deguelin組降低更加明顯。而DU145細(xì)胞用IGF-1刺激前幾乎未見(jiàn)pAKT蛋白的表達(dá)，在用IGF-1刺激15分鐘后出現(xiàn)較低水平的pAKT蛋白表達(dá)，此作用幾乎完全被Deguelin所阻斷。

8、 結(jié)論: Deguelin能夠抑制前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3增殖，呈現(xiàn)時(shí)間、濃度依賴(lài)性，對(duì)DU145細(xì)胞則無(wú)此作用。Deguelin使PC3細(xì)胞阻滯于G2/M期進(jìn)而誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡，對(duì)DU145細(xì)胞株則無(wú)此作用。在PC3細(xì)胞中，Deguelin對(duì)化療藥物TXT及MIT有化療增敏作用，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)明顯提高細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率和凋亡率，對(duì)DUl45細(xì)胞株則無(wú)此作用。Deguelin是通過(guò)抑制PI3K/AKT。而非MAPK通路實(shí)現(xiàn)抑制細(xì)胞增殖