HeLa細(xì)胞中miR-106a、miR-376a和miR-485-5p對(duì)靶基因CDH1調(diào)控實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是指具有極性的上皮細(xì)胞向具有運(yùn)動(dòng)能力的間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過(guò)程。腫瘤的侵襲和遷移與EMT過(guò)程密切相關(guān)，是生物分子（如蛋白、核酸等）相互作用的復(fù)雜過(guò)程。大量實(shí)驗(yàn)研究表明:microRNA(miRNA)在腫瘤細(xì)胞的EMT過(guò)程中起著十分重要的作用，是當(dāng)前研究腫瘤的侵襲和遷移機(jī)理的熱門(mén)課題之一。
　　本文針對(duì)宮頸腫瘤HeLa細(xì)胞的EMT過(guò)程，利用生物信息方法，從理論上篩選出HeLa細(xì)胞EMT過(guò)程中一些起重要作用的m

2、iRNA:miR-106a、miR-376a和miR-485-5p;利用分子生物實(shí)驗(yàn)方法，研究了miRNA對(duì)關(guān)鍵靶基因CDH1的調(diào)控作用機(jī)理。主要研究工作和成果如下:
　　(1)首先，用生物信息學(xué)方法(miRanda、TargetScan、FindTar、PicTar和miRBase)，從理論上預(yù)測(cè)出一批EMT過(guò)程中與關(guān)鍵鈣黏蛋白靶基因CDH1堿基互補(bǔ)的miRNA分子;從中篩選出miR-106a、miR-376a和miR-485-

3、5p作為研究對(duì)象。這些miRNA對(duì)靶基因CDH1具有下調(diào)作用，即能抑制鈣黏蛋白的表達(dá)，對(duì)HeLa細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力有重要影響。
　　(2)其次，利用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，構(gòu)建了含有miR-106a、miR-376a、miR-485-5p和CDH1基因的3'UTR區(qū)的質(zhì)粒;將miRNA質(zhì)粒和mRNA質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到HeLa細(xì)胞;對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光蛋白表達(dá)譜分析檢測(cè)含有CHD1的3'UTR區(qū)的質(zhì)粒的熒光表達(dá)量進(jìn)行分析。
　　(3)最后，利