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文檔簡介
1、流感嗜血桿菌是一種革蘭氏陰性菌。外膜蛋白的合成需要蛋白前體通過Sec通路穿過細菌內膜。而后在外膜脂雙分子層上完成最終的鑲嵌并折疊的過程,該過程大多需要有一個被稱為β-桶狀組裝機器(β-barrel Assembly Machinery,BAM)的外膜蛋白復合物協(xié)助。BAM以及它的同源系統(tǒng),在原核和真核細胞中廣泛存在。在大腸桿菌中,BAM復合物含有五個蛋白組分:BamA(外膜孔道蛋白),以及四個膜錨定蛋白BamB、BamC、BamD和Ba
2、mE。有趣的是,在流感嗜血桿菌中只含有其中四個組分:Bam A、BamC、BamD和BamE。
直到現在,關于流感嗜血桿菌中BAM復合物的結構研究依舊匱乏。在我的碩士生階段,我希望能夠對這一未知領域進行探索,這也有助于我更好地了解這一不局限于流感嗜血桿菌的古老系統(tǒng)。到目前為止,我已經克隆了BamD29-262到pET-15b中,BamC18-215、BamC45-215以及一系列的BamA POTRA片段到pET-32m中,并
3、在BL21(DE3)或者B834(用于硒代甲硫氨酸取代型蛋白)進行表達。獲得了BamD29-262晶體并且衍射到了4?。為了改善分辨率,我嘗試了BamC和BamD的共結晶并獲得了晶體,BamD29-262/BamC18-215復合物衍射分辨率最高達到3.8?。BamD29-262/BamC45-215復合物分辨率只有4.5?。脫水并不能使BamD或者BamCD復合物分辨率有所提高。硒代甲硫氨酸取代結合MAD來進行BamCD復合物的相位解
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