湖北省鴨肝炎病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性研究.pdf

1、鴨病毒性肝炎(DuckViralHepatitis，DVH)是雛鴨的一種高度致死性的、傳播迅速的病毒性疾病，以肝炎為其主要特征。DHV有1型、2型和3型3個(gè)血清型。在我國流行的主要是1型鴨肝炎病毒。該病是目前危害養(yǎng)鴨業(yè)的主要疾病之一，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究旨在從湖北地區(qū)分離鴨肝炎病毒，并通過鴨胚中和試驗(yàn)、保守區(qū)基因序列的測(cè)定、動(dòng)物回歸試驗(yàn)、動(dòng)物保護(hù)試驗(yàn)對(duì)病毒進(jìn)行鑒定，通過對(duì)鴨胚、雛鴨的致死性試驗(yàn)，對(duì)試驗(yàn)雛鴨組織病理變化的觀

2、察及組織病變的電鏡觀察，分析研究鴨肝炎病毒的致病性，同時(shí)對(duì)分離株進(jìn)行系統(tǒng)的生物學(xué)特性研究，為鴨肝炎的流行病學(xué)調(diào)查和分類學(xué)研究提供素材，并為有效地預(yù)防和控制鴨病毒性肝炎提供理論依據(jù)。研究的結(jié)果如下： 1.通過雛鴨尿囊腔接種，對(duì)湖北采集的20份疑似鴨病毒性肝炎的病鴨肝組織進(jìn)行病原分離，獲得2株病毒。將2株分離株經(jīng)鴨胚傳至第5代，收集鴨胚尿囊液病毒測(cè)定這些毒株的ELD50分別為10-3.88/0.2ml，10-4.59/0.2ml。經(jīng)

3、鴨胚中和試驗(yàn)鑒定，2株均為1型鴨肝炎病毒，分別命名為鴨肝炎病毒株DHV-1JX和DHV-1DY。 2.根據(jù)GenBank中的DHV序列，設(shè)計(jì)引物，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增病毒保守區(qū)基因組，對(duì)其進(jìn)行序列測(cè)定。與Genebank已發(fā)表的1型鴨肝炎病毒的核營酸序列同源性介于92％～97％之間，進(jìn)化樹分析JX株和DY株的親源關(guān)系較遠(yuǎn)，不在同一分支上。 3.JX和DY株病毒對(duì)11日齡鴨胚的致死性為100％，人工感染雛鴨的致死率分別為50

4、％和70％。死亡鴨呈角弓反張姿態(tài)，剖檢主要可見肝臟腫脹，有大量的出血點(diǎn)。鏡下觀察2株病毒主要侵害雛鴨肝、胰、脾、腎、腦等組織，造成實(shí)質(zhì)器官的病變，肝臟均呈出血性壞死性炎癥，DY株胰臟出現(xiàn)明顯的壞死灶。肝組織超微結(jié)構(gòu)觀察到細(xì)胞胞漿的膜狀結(jié)構(gòu)中有雙層單位膜包繞的圓形似病毒樣顆粒，直徑約為30～40nm。 4.對(duì)JX株和DY株病毒的理化特性表現(xiàn)為：病毒在56℃、30min部分滅活，62℃、30min能完全滅活，對(duì)乙醚、氯仿、胰酶有抵抗