雷帕霉素防治腹膜透析大鼠腹膜纖維化及其機理研究.pdf

1、研究背景:腹膜纖維化迄今仍然是一個世界性的難題，是導(dǎo)致尿毒癥患者被迫中斷長期腹膜透析的最主要因素。在非生理性腹膜透析液的長期刺激下，就會導(dǎo)致腹膜纖維化的發(fā)生，其主要機理是腹膜間皮細胞從上皮細胞表型向肌纖維母細胞的轉(zhuǎn)分化，即上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程的發(fā)生，由此啟動細胞增殖和膠原等基質(zhì)的積聚等，主要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)涉及到Smad通路、PI3-K/Akt/mTOR途徑等。雷帕霉素（rapamycin），通過與FK結(jié)合蛋白(FK-binding pr

2、otein，F(xiàn)KBP)結(jié)合，阻斷哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)的表達，進而抑制細胞生長與增殖。在腎、肝、心等多個臟器領(lǐng)域的研究中雷帕霉素在抗增殖和抗纖維化方面已經(jīng)顯示了重要作用。目前雷帕霉素在抗腹膜纖維化領(lǐng)域的作用也受到越來越多的重視。
　　目的:明確雷帕霉素對于腹膜透析模型大鼠腹膜纖維化的防治效果，闡明雷帕霉素對于腹膜透析模型大鼠腹膜纖維化的可能信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子機制。<

3、br>　　實驗方法:動物層面，取45只正常SD大鼠，隨機分為5組:正常組，生理鹽水組，高糖組，低濃度雷帕治療組，高濃度雷帕治療組，6周后處死，評估腹膜功能，取腹壁組織，行HE及α-SMA、TGF-β的免疫組化染色，分析各組腹壁纖維化情況;細胞層面，取正常SD大鼠腹膜，原代培養(yǎng)腹膜間皮細胞，取第3-4代細胞，予以不同濃度高糖(30，60，120mM)干預(yù)，及不同濃度雷帕霉素(10，100nM)干預(yù)，作細胞劃痕實驗，同時于處理48h后提取蛋

4、白，分析高糖對α-SMA及E-cadherin的變化，以及雷帕霉素對腹膜細胞EMT的影響。
　　結(jié)果:動物層面:高糖組大鼠的腹膜功能相較正常組及生理鹽水組明顯下降，低濃度雷帕及高濃度雷帕均顯著改善腹膜功能(P＜0.05);HE染色及α-SMA、TGF-β免疫組化顯示，高糖組呈現(xiàn)腹膜纖維化狀態(tài)，低濃度雷帕及高濃度雷帕均顯著改善腹膜纖維化狀態(tài)，且高濃度相較低濃度效果更明顯。細胞層面:高糖處理后細胞呈現(xiàn)EMT改變，表現(xiàn)為:α-SMA的表

5、達量相較正常組明顯升高，E-cadherin的表達量明顯下降，遷移率明顯增加，且呈濃度相關(guān)性(均P＜0.05)。雷帕明顯改善EMT表現(xiàn)，且呈濃度相關(guān)性(均P＜0.05)。
　　結(jié)論:通過動物層面及細胞層面驗證了雷帕霉素對高糖引起的腹膜纖維化有明顯的防治作用，在有效濃度范圍內(nèi)，其防治效果與劑量呈一定的正相關(guān)。驗證了EMT在腹膜纖維化過程中的作用。雷帕霉素抑制EMT的機制主要表現(xiàn)為:抑制腹膜間皮細胞遷移，減少TGF-β的分泌，抑制成纖