益生菌防治食物過敏的作用及其分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究益生菌及其功能成分對食物過敏大鼠模型的防治作用，對腸道屏障功能和免疫平衡的影響，并探討相關(guān)信號通路機(jī)制。 方法：60只3周齡斷乳雌性Brown-Norway大鼠分為陰性對照組、食物過敏組、益生菌全程干預(yù)組、益生菌DNA提取物組、CpG-ODN組、CpG-ODN對照組，分別采用口服灌胃給予益生菌菌粉和腹腔注射益生菌DNA提取物、CpG-ODN(1826)，及CpG-ODN對照序列(1982)。分析益生菌及其功能成分對食物

2、過敏的防治作用(OVA-IgE)，以及對腸道屏障(包括機(jī)械屏障、免疫屏障及生物屏障)和免疫平衡(Th1/Th2細(xì)胞因子平衡)的影響。采用Western及RT-PCR方法分別檢測TLR9、IRAK、IKB-α蛋白及mRNA表達(dá)，EMSA檢測腸粘膜組織NF-kB活性，以研究益生菌、益生菌DNA提取物、CpG-ODN對食物過敏大鼠腸道TLR9/NF-kB信號通路的影響。 結(jié)果：⑴動(dòng)物模型部分結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組灌胃第6、7、8周時(shí)OVA-I

3、gE抗體水平顯著高于空白對照組(P<0.05)，灌胃致敏組大鼠致敏率分別為60％(3/5)，80％(4/5)和80％(4/5)，第6周時(shí)OVA-IgE水平最高。⑵食物過敏組血清OVA-IgE濃度較陰性對照組顯著升高。益生菌活菌、DNA提取物及CpG-ODN干預(yù)后各組OVA-IgE濃度、血清FITC濃度、腸粘膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤均較食物過敏組顯著降低，小腸slgA較食物過敏組顯著升高。益生菌活菌可以起到營養(yǎng)腸道絨毛而益生菌DNA提取物及Cp

4、G-ODN在這方面的作用不明顯。益生菌活菌可以提高腸道乳酸桿菌及雙岐桿菌的含量，而益生菌DNA提取物及CpG-ODN僅能提高結(jié)腸雙岐桿菌的含量，與食物過敏組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑶食物過敏組脾和腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ水平與陰性對照組相比均無明顯差異，而食物過敏組脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4及IL-10較陰性對照組顯著升高。益生菌活菌、DNA提取物及CpG-ODN干預(yù)后IL-4、IFN-γ及IL-10都較食物過敏組顯著降低，脾I

5、FN-γ/IL-4比值較食物過敏組顯著升高。益生菌DNA提取物和CpG-ODN可以顯著提高脾CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞百分比，益生菌活菌干預(yù)后CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞百分比均較食物過敏組有升高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。⑷信號通路部分的檢測結(jié)果顯示，益生菌各劑型(益生菌活菌、益生菌DNA提取物、CpG-ODN序列)均能顯著增加TLR9 mRNA表達(dá)，激活NF-kB，IRAK4及總IKB-α表達(dá)水平無變化。但是益生菌干預(yù)組、益生菌DNA提

6、取物和CpG-ODN(1826)干預(yù)后磷酸化IKB-α(代表激活的IKB-α)有升高趨勢，其中CpG-ODN組升高最明顯。 結(jié)論：①經(jīng)口致敏可以成功建立食物過敏動(dòng)物模型，最佳致敏時(shí)間為6周。②益生菌活菌、益生菌DNA提取物、CpG-ODN序列可以降低OVA-IgE水平，起到防治食物過敏和改善腸道屏障功能的作用。但益生菌活菌、益生菌DNA提取物、CpG-ODN序列改善腸道屏障作用的環(huán)節(jié)不同。③食物過敏模型脾Th1/Th2平衡向Th