豚鼠抗A型流感病毒感染的天然免疫應答機制研究.pdf

1、A型流感病毒屬于正粘病毒科RNA病毒，可以引起人類發(fā)生急性呼吸道疾病。自上個世紀初期開始，世界上已發(fā)生了多次流感大流行。大流行流感和季節(jié)性流感對人類健康和公共衛(wèi)生造成了嚴重的影響。更讓人們擔心的是人高致病性禽流感感染者的病死率高達60％以上，此類流感一旦在人間大流行將引起災難性的后果。研究者發(fā)現(xiàn)高致病性禽流感引起感染者和動物模型死亡的主要原因是細胞因子過度表達引起的免疫損傷(“細胞因子風暴”)，但其發(fā)生和作用機制還不明確，本研究更換了研

2、究視角，以可以被高致病性流感病毒感染但不表現(xiàn)出臨床癥狀的豚鼠為模型，探討豚鼠感染A型流感病毒以后，模式識別受體、效應分子、細胞因子和趨化因子的應答特點，從而探索先天免疫在流感病毒致病機制中的作用。
　　 首先，建立了與天然免疫相關的因子的定量PCR檢測方法，包括豚鼠的IFN-β、IL-10、IL-18、IL-8、IP-10、TLR7、TLR8、RIG-1、MDA5、NLR、STAT1、MAVS、MX1、PKR、Caspase-1

3、、TNF、IFN-γ、IL-1β、CCL2、CCL5、TLR3。以該方法，用于檢測不同致病力表型的H1N1和H5N1流感病毒感染豚鼠后肺臟中上述相關因子的mRNA表達量，并對其特異性進行了驗證，結果顯示該方法特異性好，基因擴增效率基本一致，可以通過△△Ct法對mRNA的相對表達量進行數(shù)據(jù)分析。
　　 進而用不同致病力的四株A型流感病毒(兩株H1N1亞型，兩株H5N1亞型)感染豚鼠，通過對豚鼠肺臟和鼻洗液進行病毒復制滴度檢測，結果

4、顯示感染H1-XD、H1-UI-182、H5-132、H5-LW亞型流感病毒后的豚鼠鼻洗液病毒EID50最高分別可達104.5/ml、105.25/ml、105.75/ml、101.98/ml，肺臟中病毒EID50分別為105.5/ml、102.5/m1、105.25/ml、102.25/ml，但是所有攻毒第5天之后的樣品均檢測不到病毒滴度。結果表明A型H1N1和H5N1亞型流感病毒可以在豚鼠肺臟內(nèi)進行復制，但是并不引起機體產(chǎn)生臨床癥狀

5、，3-5天之后病毒就被機體清除掉。
　　 為闡明豚鼠的先天免疫應答在病毒感染與清除中的特征，我們對豚鼠感染病毒前后肺組織中與先天免疫相關的的模式受體與細胞因子mRNA表達量進行了分析。結果，對小鼠表現(xiàn)出致病性差異的H1N1亞型流感病毒感染豚鼠后，豚鼠的模式識別受體、效應分子、細胞因子和趨化因子均未發(fā)生明顯的應答；但與甲型H1N1病毒感染豚鼠表現(xiàn)不同的是，豚鼠感染在小鼠上表現(xiàn)出不同致病力表型的H5N1高致病性流感病毒后，豚鼠的模式

6、識別受體RIG-1和MDA5升高明顯，下游效應分子MX1和PKR升高顯著，說明豚鼠的產(chǎn)生了針對H5N1病毒的先天免疫應答，但另人感興趣的是，豚鼠體內(nèi)細胞因子和趨化因子變化不明顯，尤其是IL-1、IL-8和TNF-α幾種細胞因子“風暴”標志性細胞因子均未明顯增高，說明豚鼠可能有別于其他哺乳動物，具有抑制細胞因子“風暴”發(fā)生的能力，從而保護機體免受泛嗜性炎癥損傷。
　　 本研究結果提示我們可以通過進一步研究闡明豚鼠先天免疫應答在抗流