桃再生體系的優(yōu)化與反義PG基因遺傳轉化的研究.pdf

1、桃（Prunus persical（L.）Batsch）是世界性重要果樹，我國是桃主產(chǎn)國，產(chǎn)量居世界之首，甘肅省是桃的原產(chǎn)地和最適栽培區(qū)之一。桃是典型的呼吸躍變型果實，成熟果實采后很快出現(xiàn)呼吸高峰，果肉迅速變軟，給貯藏運輸帶來極大不便，這是長期制約桃生產(chǎn)的主要問題之一。而通常采用的低溫冷藏等方法易造成桃果冷害，結果十分不理想。因此，通過植物基因工程技術控制果實軟化，選育出耐貯運的桃新品種是從根本上解決桃貯運難題的有效途徑之一。本研究通過

2、反義基因技術特異性抑制果實成熟后PG的表達，有望延遲桃果實的軟化，獲得耐貯性硬溶質桃新種質。本研究以甘肅省常栽品種白粉桃為試材，建立了桃遺傳轉化再生體系，并以白粉桃莖段為材料，在優(yōu)化桃遺傳轉化再生體系的基礎上，通過根癌農(nóng)桿菌介導反義PG基因轉化，得到了轉化植株并用PCR進行了檢測。研究主要取得如下結果：
　　 ⑴以白粉桃幼莖和花后不同時間成熟的果實種胚為外植體，進行桃遺傳轉化再生體系優(yōu)化。其幼莖最佳誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA1.

3、0mg/L+NAA0.5mg/L，誘導率可達93.5％。開花75d后的種胚能在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L上直接誘導分化成苗，誘導分化率可達91.5％。將不定芽用100mg/L IBA浸蘸其基部轉移到不含激素的1/2MS培養(yǎng)基中誘導生根，生根率達到78％。
　　 ⑵用攜帶有多聚半乳糖醛酸酶（PG）基因反義片段和35S啟動子的表達載體pCAMBIA2300，轉化白粉桃莖段。受體材料預培養(yǎng)3d后，經(jīng)根癌農(nóng)桿菌