肥頭鰷血紅素加氧酶-1(HO-1)基因的克隆與表達(dá)研究.pdf

1、血紅素加氧酶(heme oxygenase，HO)是血紅素代謝的限速酶。HO-1也稱熱休克蛋白32(Heat shock protein32，HSP32)，能夠抗氧化、抗凋亡、抗炎癥、抗增殖等，具有細(xì)胞保護(hù)作用。越來越多的研究亦顯示HO-1可拮抗微生物感染，且在病毒感染中可能也具有保護(hù)作用。目前有關(guān)HO-1與病毒感染的相關(guān)研究主要集中于哺乳動物。
　　 為了研究病毒感染對魚類HO-1表達(dá)的影響，以及魚類HO-1在病毒感染中的作用

2、，從而提供可能的病毒性疾病的治療新方法，本研究以鯉魚上皮瘤細(xì)胞(Epithelioma Papulosum Cyprini，簡稱EPC)為實(shí)驗(yàn)材料，克隆得到肥頭鰷HO-1基因的cDNA全序列，進(jìn)一步從細(xì)胞水平上探討了鯉春病毒血癥病毒(SVCV)感染及鈷原卟啉(CoPP)對肥頭鰷(Pimephales promelas)HO-1基因表達(dá)的影響，主要結(jié)論如下：
　　 1.肥頭鰷HO-1基因cDNA的克隆及系統(tǒng)進(jìn)化分析
　　

3、利用RT-PCR及RACE法從EPC細(xì)胞中克隆得到肥頭鰷HO-1 cDNA。該序列全長為1110bp，5’端非翻譯區(qū)為52bp，3’端非翻譯區(qū)為203bp，3’非編碼區(qū)含有多聚A加尾信號(AATAAA)、RNA不穩(wěn)定序列(ATTTA)，其開放閱讀框(ORF)為858bp，編碼285AA。功能預(yù)測顯示其含有一個血紅素加氧酶特征序列(AA129-152)和跨膜區(qū)(AA264-285)。氨基酸序列分析表明，肥頭鰷HO-1與哺乳動物、鳥類及其他

4、魚類的HO-1同源，與魚類的同源性較高(58.8%-72.7%)，且與斑點(diǎn)叉尾鮰和藍(lán)鯰的同源性最高，分別為72.4%和72.7%，與人、鼠、雞的同源性較低，分別為44.1%、44.1%，45.4%。
　　 2.SVCV感染對肥頭鰷HO-1表達(dá)的影響研究
　　 利用RT-PCR及Real-Time PCR技術(shù)在細(xì)胞水平上研究SVCV感染對HO-1的表達(dá)影響時發(fā)現(xiàn)，在1 MOI感染條件下，同對照組比較，HO-1的表達(dá)水平在感

5、染3小時即下降，在感染6小時后達(dá)到最低值，進(jìn)而有緩慢的升高，但仍低于對照組。在0.1 MOI感染條件下，同對照組比較，HO-1的表達(dá)水平在感染后6小時開始下降，在12小時至最低值，至24小時有緩慢的上升，但仍低于對照組，結(jié)果說明SVCV感染能抑制HO-1的表達(dá)。
　　 3.鈷原卟啉(CoPP)對肥頭鰷HO-1的誘導(dǎo)表達(dá)研究
　　 以不同濃度的鈷原卟啉(CoPP)對EPC細(xì)胞進(jìn)行處理，運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)檢測肥頭鰷H