氟苯尼考、安普霉素藥物殘留的ELISA檢測(cè)方法研究.pdf

1、氟苯尼考和安普霉素分別屬于氯霉素類和氨基糖苷類抗生素，目前在臨床上應(yīng)用十分普遍。并且兩者在畜禽組織中的殘留都會(huì)引起一系列后果。酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(ELISA)是一種簡(jiǎn)便、快速，并非常適合大規(guī)模樣品篩選的檢測(cè)方法，但國(guó)內(nèi)主要依靠?jī)r(jià)格昂貴的進(jìn)口試劑盒。研制自主產(chǎn)權(quán)的快速檢測(cè)ELISA試劑盒，已成為當(dāng)務(wù)之急。因此，針對(duì)二者殘留的快速檢測(cè)方法的建立對(duì)控制動(dòng)物性食品的質(zhì)量等方面具有重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)利益。 本論文旨在建立畜禽產(chǎn)品中氟苯尼考和安普

2、霉素殘留的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附(ci-ELISA)檢測(cè)方法。研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： 實(shí)驗(yàn)一氟苯尼考和安普霉素人工抗原的合成及鑒定 采用混合酸酐法，將氟苯尼考分別與載體蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)；采用碳化二亞胺法將安普霉素與BSA偶聯(lián)、戊二醛法將安普霉素與OVA偶聯(lián)；制備出四種人工抗原FFC-HS-BSA、FFC-HS-OVA、Apra-BSA和Apra-OVA。制備的人工抗原經(jīng)凝膠電泳(SDD-P

3、AGE)、紫外掃描(UV)、紅外掃描(IR)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了驗(yàn)證，均證明了人工抗原合成成功。 實(shí)驗(yàn)二氟苯尼考抗體的制備和安普霉素抗體的制備及鑒定 分別用FFC-HS-BSA和Apra-BSA作為免疫原免疫新西蘭純種白兔。制備的抗血清分別用間接ELISA和間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)效價(jià)和特異性，結(jié)果如下；氟苯尼考抗血清終點(diǎn)效價(jià)在1：51200以上，安普霉素抗血清終點(diǎn)效價(jià)在1：25600以上，并且特異性都很高。 實(shí)驗(yàn)三雞

4、肉中氟苯尼考ELISA檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用 通過(guò)對(duì)氟苯尼考間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA的條件優(yōu)化得到如下結(jié)論：抗血清稀釋度為1：6400，封閉液為5％脫脂奶粉溶液，包被抗原FFC-HS-OVA的濃度為0.5μg/mL，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)羊抗兔IgG(HRP-IgG)稀釋度為1：20000。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)條件，間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)氟苯尼考，得到回歸方程Y=-0.1516X+0.788，相關(guān)系數(shù)R2=0.9859(其中y為B/B0，x為Ig[FF

5、C])，IC50=79.3 ng/ml，最低檢測(cè)限(LOD)=0.18 ng/ml，線性范圍在0.18～500ng/ml。批內(nèi)和批間平均變異系數(shù)分別為4.86％和7.77％。交叉反應(yīng)試驗(yàn)中，抗血清與FFC結(jié)構(gòu)相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反應(yīng)率分別為0.094％和0.098％，與其它藥物交叉反應(yīng)率均小于0.01％，表明該方法具有很強(qiáng)的特異性。雞肉中添加回收率在84.14％～106.1％之間，回收率較高，能滿足雞肉中氟苯尼考的定性定量檢測(cè)。

6、 實(shí)驗(yàn)四雞肉中安普霉素ELISA檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用 通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)安普霉素，得到回歸方程：y=12.666x+28.22，相關(guān)系數(shù)R=0.9724(其中y為1-B/B0，x為Ig[Apra])。方法的最低檢測(cè)限為0.1ng/mL，IC50=52.4 ng/ml，線性范圍為0.1～100ng/mL?？组g差異為4.15％，板間差異為6.59％，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好。雞肉中添加回收率在89.45％～108％之間。在交叉反應(yīng)