豬組織中氟尼辛殘留檢測(cè)方法研究.pdf

1、氟尼辛為動(dòng)物專用的非甾體抗炎藥(NSAIDs)，在獸醫(yī)臨床上常用其葡甲胺鹽(FM)，主要通過(guò)抑制花生四烯酸合成鏈中的環(huán)氧化酶，來(lái)減少前列腺素和血栓烷素等炎性介質(zhì)的生成，而有效地緩解機(jī)體的發(fā)熱、疼痛和炎癥。
　　EMEA和FDA相繼規(guī)定了豬可食組織中氟尼辛的最大殘留限量，而中國(guó)卻未制定其MRL。同時(shí)，國(guó)內(nèi)外針對(duì)豬可食組織中氟尼辛殘留量的檢測(cè)方法報(bào)道的很少，且方法存在重現(xiàn)性差、操作繁瑣、靈敏度低等缺陷。隨著FM在畜牧生產(chǎn)中的廣泛使用，

2、從食品安全角度考慮，建立一種可靠的豬可食組織中氟尼辛殘留量的檢測(cè)方法是非常有必要的。
　　本研究目的是建立一種可靠、快速、靈敏的UPLC-MS/MS檢測(cè)方法，應(yīng)用于豬可食組織（肌肉、皮脂、肝臟、腎臟）、血漿、尿液、糞便中氟尼辛殘留量檢測(cè)，同時(shí)將該方法應(yīng)用于氟尼辛在豬體內(nèi)殘留消除試驗(yàn)和代謝試驗(yàn)的研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1.豬可食組織中氟尼辛殘留檢測(cè)方法的建立
　　建立了一種可靠、快速、靈敏的UPLC-MS/MS方法

3、用于豬肌肉、皮脂、肝臟、腎臟組織中氟尼辛的殘留檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)選用乙酸乙酯-乙腈(1∶1，V/V)對(duì)組織中的待測(cè)物進(jìn)行提取，Oasis MCX固相萃取柱凈化，Acquity UPLC BEH C18色譜柱梯度洗脫，肉標(biāo)法定量。在電噴霧正離子模式(ESI+)下選擇多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行分析。方法在豬肌肉、皮脂、肝臟、腎臟組織中的檢測(cè)限(LOD)和定量限(LOQ)分別為0.5μg·kg-1和1μg·kg-1;在1～200μg·kg-1濃度

4、范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系(R2＞0.999);待測(cè)物的回收率為73.7～124.3％，日內(nèi)精密度及日間精密度＜17.8％。
　　2.豬血漿、尿液、糞便中氟尼辛殘留檢測(cè)方法的建立
　　建立了一種可靠、快速、靈敏的UPLC-MS/MS方法用于豬血漿、尿液、糞便中氟尼辛的殘留檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)選用乙腈對(duì)血漿進(jìn)行提取;乙腈-2％磷酸溶液(1∶4，V/V)對(duì)尿液進(jìn)行提取，Oasis MCX固相萃取柱凈化;乙酸乙酯-乙腈(1∶1，

5、V/V)對(duì)糞便進(jìn)行提取，Oasis MCX固相萃取柱凈化，Acquity UPLC BEH C18色譜柱梯度洗脫，內(nèi)標(biāo)法定量。該方法在血漿中的LOD和LOQ分別為0.25μg·L-1和0.5μg·L-1;尿液中分別為0.25μg·L-1和0.5μg·L-1;糞便中分別為0.5μg·kg-1和1.0μg·kg-1。在0.5～500μg·kg-1（或μg·L-1）濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系(R2＞0.999);待測(cè)物的回收率分

6、別為68.9～118.6％,日內(nèi)精密度及日間精密度＜18.3％。
　　3.氟尼辛在豬可食組織中殘留消除試驗(yàn)研究
　　27頭健康豬被隨機(jī)分為5個(gè)給藥組（每組5頭）和1個(gè)空白對(duì)照組（1公1母），給藥組豬按2.2 mg·kg-1（以氟尼辛計(jì)）的劑量肌肉注射FM注射液，一日一次，連續(xù)給藥3天，空白對(duì)照豬不做處理。在最后一次給藥后第0.5、6、11、16、23天各屠宰5頭給藥豬，第7天屠宰2頭空白對(duì)照豬，收集組織樣品，勻漿后保存。使用

7、已建立的UPLC-MS/MS檢測(cè)方法，進(jìn)行消除試驗(yàn)研究。結(jié)果表明:本研究建立的UPLC-MS/MS檢測(cè)方法成功地用于豬可食組織中氟尼辛殘留消除研究。健康豬注射給以氟尼辛，在最后一次給藥后第16天，各種組織中的氟尼辛濃度都低于最大殘留限量(MRL);在第23天時(shí)幾乎檢測(cè)不到該藥物。對(duì)本試驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)采用休藥期計(jì)算軟件WT1.4計(jì)算的豬肌肉、皮脂、肝臟、腎臟、注射位點(diǎn)肌肉、注射位點(diǎn)皮脂組織的休藥期分別為5.15d、23.37 d、9.78

8、d、19.70 d、18.72 d、26.76 d。
　　4.氟尼辛在豬體內(nèi)代謝試驗(yàn)研究
　　9頭健康豬被隨機(jī)分為1個(gè)給藥組（4公3母）和1個(gè)空白對(duì)照組（1公1母），給藥組豬按2.2 mg·kg-1（以氟尼辛計(jì)）的劑量肌內(nèi)注射FM注射液，一日一次，連續(xù)給藥3天，空白對(duì)照豬不做處理。收集血漿、尿液、糞便樣品，混勻后保存。使用已建立的UPLC-MS/MS檢測(cè)方法，測(cè)定血液、尿液、糞便中的氟尼辛的殘留量，進(jìn)行代謝試驗(yàn)研究。結(jié)果顯示