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文檔簡介
1、自身免疫病與自身抗體的檢測,與自身免疫性疾病相關(guān)的基本概念,免疫 機體識別和排除抗原性異物的功能,也就是機體免疫系統(tǒng)對抗原刺激所產(chǎn)生的以排除抗原為目的的生理過程。 體液免疫--- 產(chǎn)生抗體細胞免疫---致敏淋巴細胞,與自身免疫性疾病相關(guān)的基本概念,隱蔽抗原:機體有些組織成分由于解剖位置的特殊性,正常情況下終生不與免疫系統(tǒng)接觸,稱為隱蔽抗原。眼晶狀體、葡萄膜---交感性眼炎;精子—男性不育。,與
2、自身免疫性疾病相關(guān)的基本概念,自身免疫:是指機體免疫系統(tǒng)對自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答,產(chǎn)生自身抗體和(或)致敏淋巴細胞的現(xiàn)象。,與自身免疫性疾病相關(guān)的基本概念,自身免疫病: 是指在各種內(nèi)外因素的作用下,自身免疫反應(yīng)過強,超過了生理性自身免疫反應(yīng)的強度且持續(xù)相當長時間,造成對正常細胞、器官的功能與結(jié)構(gòu)的破壞,呈現(xiàn)與此損傷相關(guān)的臨床表現(xiàn)及免疫學(xué)異常。,自身免疫性疾病發(fā)生的原因,機體抗原特異性淋巴細胞發(fā)生異常,對正常組織發(fā)生
3、免疫應(yīng)答狀態(tài);機體自身組織成分發(fā)生改變從而引起的免疫應(yīng)答狀態(tài)。,自身免疫病的基本特征,多數(shù)自身免疫病的病因不清,有些自身免疫病的發(fā)生和復(fù)發(fā)似乎與某些外因有關(guān),但大多數(shù)自身免疫病是“自發(fā)”地發(fā)生的,目前未找到肯定的外因。,自身免疫病的基本特征,血液中可檢出高滴度的自身抗體和(或)與自身組織成分起反應(yīng)的致敏淋巴細胞。,自身免疫病的基本特征,組織器官損傷和功能障礙的范圍取決于自身抗原分布:器官特異性自身免疫?。簶虮臼霞谞钕傺?,非器官特
4、異性自身免疫?。喝缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)。,自身免疫病的基本特征,自身免疫病的發(fā)生與多因素相關(guān),包括遺傳因素、性別差異、年齡大小、氣候環(huán)境及地理位置等。,自身免疫病的基本特征,遺傳因素: 強直性脊柱炎(AS)患者90%為HLA--B27陽性,然而在HLA--B27陽性的人群中發(fā)生強直性脊柱炎的可能僅為2%,而第一級HLA--B27陽性的親屬中,發(fā)生強直性脊柱炎的危險性達20%。,自身免疫病的基本特征,系統(tǒng)性紅斑
5、狼瘡(SLE)的家族發(fā)病率也較高,在SLE第一代親屬中發(fā)病率達3%--5%,同胞姐妹發(fā)病率更高,特別是單卵雙胎更為常見 。在1980年的調(diào)查中35組單卵雙胎的患者中,有22組患SLE,共患病率達62.9%,而雙卵雙胎8組中僅1組患病,為12.5%。,自身免疫病的基本特征,性別差異和年齡大?。?強直性脊柱炎(AS)多見于年輕男性,其發(fā)病年齡從4---90歲不等,但以15---20歲多見,男女比列為9--10:1,但最
6、近有人調(diào)查發(fā)現(xiàn)男女比列約為1.5--3:1,只不過女性 強直性脊柱炎患者起病緩慢,病情較輕,易被誤診。,自身免疫病的基本特征,系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是最常見的自身免疫性疾病之一,發(fā)病的男女比列為1:9,在生肓年齡甚至可高達1:30,而且多發(fā)生于20--40歲的孕齡婦女。,自身免疫病的基本特征,大多數(shù)自身免疫病呈現(xiàn)出發(fā)作——緩解——復(fù)發(fā)——緩解——遷延的臨床特征,以致成為終身痼疾。,自身免疫病的基本特征,免疫抑制劑(腎上腺皮質(zhì)激素、環(huán)磷
7、酰胺)治療有一定療效,但副作用與不良反應(yīng)嚴重,停藥后常易復(fù)發(fā)。,自身免疫性疾病臨床“病譜”,器官特異性 非器官特異性橋本甲狀腺炎 類天皰瘡 自身免疫性腎小球腎炎 系統(tǒng)性紅斑狼瘡原發(fā)性粘液水腫 惡性貧血 肺
8、腎出血綜合征 干燥綜合征甲狀腺機能亢進 自身免疫性萎縮性胃炎 絕經(jīng)過早(少數(shù)病例) 類風濕關(guān)節(jié)炎Addisino病 自身免疫性肝炎 男性不育(少數(shù)病例) 硬皮病1型糖尿病 原發(fā)性膽汁性肝硬化 潰瘍性結(jié)腸炎 多發(fā)性肌炎/皮肌炎重癥肌無力
9、 原發(fā)性硬化性膽管炎 克隆氏病 混合性結(jié)締組織病多發(fā)性硬化癥 自身免疫性溶血性貧血 交感性眼炎 系統(tǒng)性血管炎脫髓鞘疾病 特發(fā)性血小板減少性紫癜 晶狀體源性葡萄膜炎 抗磷脂綜合征尋常天皰瘡 特發(fā)性粒細胞減少癥
10、 藥物性狼瘡自身免疫性疾病有一百多種,發(fā)病率占世界人口的10%自身免疫性疾病幾乎遍布臨床各科(非手術(shù)科)? 疑難病癥?,常見的自身免疫性疾病圖片資料,系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE),常見的自身免疫性疾病圖片資料,類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA),常見的自身免疫性疾病圖片資料,系統(tǒng)性硬化癥(PSS),常見的自身免疫性疾病圖片資料,干燥綜合癥(SS),常見的自身免疫性疾病圖片資
11、料,皮肌炎/多發(fā)性肌炎(DM/PM),自身抗體的檢測,自身抗體:是指抗自身細胞內(nèi),細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白。,自身抗體的檢測,自身抗體是自身免疫病的重要標記,每種自身免疫病都伴有特征性的自身抗體,某些自身抗體因?qū)膊〉脑\斷具有高度的特異性,已成為診斷某些疾病的血清標記性抗體或特異性抗體,某些自身抗體與疾病的活動性有相關(guān)性,個別的自身抗體被證實參與了組織的免疫病理損傷。,自身抗體的檢測,自身抗體檢測的臨床意義有助于自身免疫
12、病的早期診斷;有助于判斷疾病的活動性和預(yù)后,觀察治療反應(yīng),指導(dǎo)臨床用藥;有助于進一步研究和闡明自身免疫性疾病的發(fā)病機制。,自身抗體的檢測方法,間接熒光染色技術(shù)(IIF)實驗原理細胞、組織切片或純化的、生化性質(zhì)明確的物質(zhì)均可作為檢測自身抗體或病原體抗體的抗原基質(zhì)。如標本為陽性,已稀釋血清中的特異性抗體將與包被在固相上的抗原結(jié)合。第二步,已結(jié)合的抗體與熒光素標記的抗人抗體結(jié)合,然后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。,自身抗體的檢測方法,間接
13、熒光染色技術(shù)(IIF),自身抗體的檢測方法,間接熒光染色技術(shù)(IIF)特異性高:陰陽性結(jié)果的信號強度對比明顯。每種已結(jié)合的抗體在相應(yīng)抗原的位置產(chǎn)生典型的熒光模型。基質(zhì)中抗原譜完整,可檢測多種抗體,并且檢出率高。當制備酶免試劑所需要的抗原太困難或復(fù)雜時,可選擇間接免疫熒光法。,自身抗體的檢測方法,核均質(zhì)型:ds-DNA或抗組蛋白?,,自身抗體的檢測方法,斑點型(S):抗SSA、抗SSB?,,自身抗體的檢測方法,著絲點型(ACA):抗
14、著絲點抗體。,自身抗體的檢測方法,抗紡錘體抗體,,自身抗體的檢測方法,ELISA法檢測ANA[原理]:利用ELISA法,搜集細胞核和細胞漿抗原,如ds-DNA、Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、centromere、Jo-1等混合液包被微孔板,檢測抗核抗體。,自身抗體的檢測方法,ELISA法與IIF法比較,有操作簡便,結(jié)果判斷較客觀,無需熒光顯微鏡等優(yōu)點,現(xiàn)在一些醫(yī)院用ELISA法來作檢測ANA的篩選方法。
15、,自身抗體的檢測方法,顆粒凝集法(PA)[原理]:以檢測抗脫氧核糖核蛋白體(抗DNP抗體)為例。從小牛胸腺中提取脫氧核糖核蛋白(DNP)抗原,致敏聚苯乙烯乳膠,制成抗DNP抗體乳膠凝集試劑,當血清中存在抗DNP抗體時,便與乳膠顆粒上的DNP抗原結(jié)合,使乳膠顆粒相互凝集出現(xiàn)肉眼可見的凝集顆粒。,自身抗體的檢測方法,金標免疫斑點法[原理]:斑點反應(yīng)板上固相純化抗原與血清中抗體形成復(fù)合物,膠體金標記抗人IgG單抗與復(fù)合物結(jié)合,形成肉眼可見
16、的紅色圓斑點。本法用于快速檢測血清中抗體。,自身抗體的檢測方法,免疫印跡法(IB):[原理]:用SOS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,將抗原按分子量大小予以分離,再將其轉(zhuǎn)移至硝酸纖維薄膜,如果受檢血清含有相應(yīng)抗原的自身抗體,則在相應(yīng)位置會發(fā)生免疫反應(yīng),再加酶標抗體,底物,顯色液和終止液,在抗原抗體反應(yīng)的位置出現(xiàn)顯色帶,與標準帶相比較。,自身抗體的檢測方法,免疫印跡法(IB):,自身免疫病常規(guī)實驗室檢查,血常規(guī):RA:80%貧血,活動期PLT升
17、高。 SLE:WBC,PLT,Hb均可能降底。免疫血管炎:WBC增高。對藥物引起的骨髓抑制的監(jiān)測。,自身免疫病常規(guī)實驗室檢查,尿常規(guī):SLE:尿蛋白及RBC的出現(xiàn)表明腎臟損傷。,自身免疫病常規(guī)實驗室檢查,肝功能:如有異常,應(yīng)鑒別是何種性質(zhì)(自身免疫肝病?)病原感染常規(guī)檢查肝炎病毒:HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV……EBV,TB……,自身免疫病常規(guī)實驗室檢查,腎功能:免疫腎?。⊿LE?血管炎?)肌酶:多發(fā)性
18、肌炎/皮肌炎(PM/DM)尿酸:痛風?,自身免疫病常規(guī)實驗室檢查,免疫血清學(xué)檢查免疫球蛋白、血清蛋白電泳(高球蛋的血癥)。ESR、CRP(急性期蛋白):對病情活動性的判斷。CH50、C3、C4:SLE活動期均降底。ASO:鏈球菌感染,風濕熱。,自身免疫病常規(guī)實驗室檢查,抗核抗體譜(ANAs)抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCAs)類風濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)抗體自身免疫性肝病相關(guān)抗體抗磷脂抗體其它……,抗核抗體譜(ANAS)的檢測,抗
19、核抗體(ANA)是自身抗體中的一組抗體。ANA的研究,從發(fā)現(xiàn)狼瘡(LE)細胞算起,迄今40多年來,人們對ANA的認識不斷加深,已衍生出具有不同臨床意義的二十余種ANA,形成了抗核抗體譜(ANAS)。,抗核抗體譜(ANAS)的檢測,抗核抗體:傳統(tǒng)定義:顧名思義是指抗細胞核抗原成分的自身抗體的總稱?,F(xiàn)代定義:是指抗細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。,抗核抗體譜(ANAS)的檢測,ANA檢測—IIF法(金標準) 1、90%以上實驗
20、室使用Hep-2細胞為底物; 2、為人來源培養(yǎng)細胞(人喉癌細胞),據(jù)有核大、細胞結(jié)構(gòu)清晰特點; 3、便于結(jié)構(gòu)觀察及熒光染色核型分析; 4、 核抗原豐富、特異性強、有完整的ANA抗原譜(細胞核、漿、骨架、周期); 5、可預(yù)測分析ANA靶抗原范圍; 6、 經(jīng)驗性強。,IIF法檢測ANA陽性常見熒光染色模型細胞核 細胞漿 細胞骨架 細胞周期均質(zhì)型 核糖體型 肌動蛋白型 中
21、心體型核膜型 線粒體型 波形蛋白型 紡錘體型斑點型 高爾基體 中間體型核仁型 溶酶體型著絲點 顆粒型(粗、細)PCNA型核(多、少)點型,,抗核抗體譜(ANAS)的檢測,在實際工作中,不管用何種方法來檢測ANA,實際上都是指總抗核抗體檢測。若檢測結(jié)果為陽性,則需進行分型。,抗核抗體譜(ANAS)的檢測,抗核抗體(ANA)的陽性率SLE
22、 >95%PSS 70-80%MCTD >95%SS
23、 60-70%PM/DM 50-60%RA 20-30%自身免疫性肝炎 80-90%正常人 5-2
24、0%,IIF法檢測ANA陽性常見熒光染色模型細胞核 細胞漿 細胞骨架 細胞周期均質(zhì)型 核糖體型 肌動蛋白型 中心體型核膜型 線粒體型 波形蛋白型 紡錘體型斑點型 高爾基體 中間體型核仁型 溶酶體型著絲點 顆粒型(粗、細)PCNA型核(多、少)點型,,抗心磷脂抗體(ACL),抗心磷脂抗體(Anti
25、-Cardiolipin Antibodies ACL)是抗磷脂抗體中的一個重要組成部分,可在多種結(jié)締組織病中出現(xiàn),抗心磷脂抗體可分為IgA、 IgM、IgG。,抗心磷脂抗體(ACL),研究表明ACL在SLE中陽性率為30%,其次在RA中陽性率為23%,都以IgG型為主。在SLE病人當中ACL陽性者狼瘡腦病的發(fā)病率明顯高于ACL陰性患者,另外,血小板減少,血管栓塞和習慣性流產(chǎn)也與ACL抗體密切相關(guān)。,抗心磷脂抗體(ACL),,類風濕
26、性關(guān)節(jié)炎(RA)的早期診斷,類風濕因子(Rheumatoid Factor RF)是IgGFc端的自身抗體,因為它是抗體(即IgG)的對應(yīng)抗體,故也稱為抗抗體。RF可以是IgG、IgA、IgM型,現(xiàn)在一般說的RF是指IgM類風濕因子。,類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的早期診斷,RF出現(xiàn)于的RA病人血清中,約30%的SLE、約50%的SS,部分MCTD和少數(shù)PSS病人也可呈陽性,在某些病毒、原蟲、細菌感染和腫瘤等非自身免疫病患者也可以出現(xiàn)。,類
27、風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的早期診斷,RA是一種最常見的自身免疫性疾病,在全世界大約有1%的人患有此病。是以關(guān)節(jié)滑膜炎癥的慢性自身免疫性疾病,其預(yù)后變異大,輕者發(fā)生輕度關(guān)節(jié)畸形,重者則發(fā)生嚴重致死性病變。RA診斷和治療晚,則療效不滿意。早期診斷和治療,炎癥有可能發(fā)生可逆性改變,這就顯得RA的早期診斷極為重要。,類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的早期診斷,類風濕因子(RF): 陽性率為79%,特異性為63%。抗核周因子抗體(APF) : 陽性率達為
28、81%,特異性為73-90%??菇琴|(zhì)蛋白抗體(AKA): 陽性率為36-69%,特異性為95-99%。抗RA33抗體: 陽性率為35%,病情相對較重。,類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的早期診斷,抗Sa抗體:IB法檢測的敏感性為40%,特異性為99%,陽性預(yù)報率為98%。,類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的早期診斷,抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體:一種遠比類風濕因子特異的RA的指標??笴CP陽性患者比陰性的患者更容易發(fā)展成可通過放射性方法檢測到的關(guān)節(jié)
29、損傷。ELISA法敏感性為80%,特異性為96%。在79%的早期患者中可檢出抗CCP抗體。,類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的早期診斷,這幾種抗體都可以在RA起病一年內(nèi)出現(xiàn),除RF外的幾種抗體對RA的診斷具有很高的特異性,故對RA的早期診斷有很大的幫助。,抗中性粒細胞胞漿抗體譜(ANCA),ANCA是一種以中性粒細胞和單核細胞胞漿成分為靶抗原的自身抗體。80年代中期發(fā)現(xiàn)ANCA,是臨床診斷原發(fā)小血管炎的重要血清學(xué)標志。近10年來國際上對ANC
30、A的研究進入了高潮,重要的ANCA抗原相繼發(fā)現(xiàn)。,抗中性粒細胞胞漿抗體譜(ANCA),ANCA靶抗原包括:蛋白酶3(PR3)髓過氧化物酶(MPO)人白細胞彈性a蛋白酶(HEL)乳鐵蛋白(LF)組織蛋白酶G(CG)人溶酶體相關(guān)膜蛋白2(H-LAMP2),抗中性粒細胞胞漿抗體譜(ANCA),溶菌酶(LYS)殺菌/膜通透性增高蛋白(BPI)天青殺素防御素α -浠醇酶β-葡萄糖醛酸酶,抗線粒體抗體(antimitochon
31、drial antibodies AMA) AMA是一種無種屬特異性和器官特異性的自身抗體。1965年WalRer等首先應(yīng)用間接免疫熒光法(IIF)發(fā)現(xiàn)原發(fā)性膽汁肝硬化(PBC)患者血清中存在AMA。其后研究發(fā)現(xiàn),PBC患者的AMA陽性率可高達90%,此項已成為PBC診斷的主要檢查項目。,AMA迄今發(fā)現(xiàn)的亞型共有9種(M1-M9),其中與PBC相關(guān)的有4種,即抗M2、M4、M8、M9??筂2被認為是PBC敏感特異的
32、診斷標志性抗體。M2靶抗原的主要成分為丙酮酸脫氫酶復(fù)合物E2組分。高滴度的AMA-M2在PBC中陽性率大于96%,對PBC的診斷及鑒別有很高的特異性。,間接免疫熒光(IIF)是檢測ANCA最早采用的方法,應(yīng)用灑精固定的白細胞制備的抗原底物片,主要表現(xiàn)為兩種陽性熒光染色型。,胞漿型ANCA(c-ANCA):中性粒細胞胞漿彌漫性顆粒樣染色,并在核葉之間有重染者稱之。其靶抗原主要是蛋白酶3(PR3),存在于中性粒細胞嗜天青顆粒中,約占c-AN
33、CA的80-90%。,PR3-ANCA在臨床上與韋格納氏肉芽腫(WG)密切相關(guān),c-ANCA診斷WG的特異性大于90%。PR3-ANCA在其它原發(fā)性血管炎中也可被檢測到,如顯微鏡下多血管炎(MPA)、壞死性新月體型腎小腎炎(NCGN)、結(jié)節(jié)性多動脈炎(PAN)。,核周型ANCA(p-ANCA):中性粒細胞核周圍發(fā)熒光者稱之。其靶抗原主要是髓過氧化物酶(MPO),存在于中性粒細胞嗜苯胺藍顆粒中,資料顯示MPO-ANCA參與血管炎相關(guān)疾病的
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