串珠素在冠心病治療性血管生成中的作用及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究.pdf

1、冠心病是人類疾病死亡的重要原因，其防治是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域亟待解決的問題。冠心病患者心肌毛細(xì)血管密度下降，嚴(yán)重影響冠狀血流儲備和心肌供血，與心臟事件的發(fā)生密切相關(guān)。誘導(dǎo)缺血心肌血管生成可以改善供血，是冠心病防治的重要措施之一。血管生成(angiogenesis)是指機體在發(fā)育過程中或創(chuàng)傷修復(fù)、缺血缺氧和炎癥等情況下，原有內(nèi)皮細(xì)胞(endothelialcell，EC)經(jīng)過出芽、遷移、增殖與基質(zhì)重塑等形成新生毛細(xì)血管的過程。包括五個過程：(1)蛋白

2、水解酶降解血管基底膜；(2)血管內(nèi)皮細(xì)胞穿過基底膜遷移到周圍基質(zhì)；(3)內(nèi)皮細(xì)胞增殖相互連接；(4)形成管腔樣結(jié)構(gòu)；(5)基質(zhì)重塑、平滑肌細(xì)胞包繞及血管相互吻合形成血管網(wǎng)。 血管生成是一個非常復(fù)雜的過程，受到多種因素的調(diào)節(jié)?；啄ぴ谡{(diào)節(jié)血管生成中發(fā)揮著重要作用?；啄ぶ饕衫w維性蛋白質(zhì)、氨基多糖和蛋白聚糖等組成，蛋白聚糖參與調(diào)節(jié)基底膜蛋白質(zhì)的相互作用，是維持基底膜功能的重要成分。串珠素(Perlecan)是基底膜中主要的蛋白聚糖

3、之一，參與細(xì)胞增殖、脂蛋白攝取、細(xì)胞黏附和基質(zhì)的組裝。串珠素側(cè)鏈可以結(jié)合堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)等生長因子，使其免被降解，誘導(dǎo)bFGF與其受體高親和結(jié)合，并調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)運和生物利用度。但目前關(guān)于串珠素在缺血心肌血管生成中的作用及其細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制尚未見報道。 本工作在整體和細(xì)胞水平研究串珠素在bFGF誘導(dǎo)血管生成中的作用及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制，主要方法與結(jié)果如下：

4、 1、建立在體大鼠急性心肌梗死模型，隨機分為3組，心肌缺血組(myocardialinfarctiongroup，MI組)、bFGF+心肌缺血組(bFGF+MI組)和假手術(shù)組(sham組)，分別于心肌梗死后24h、14d、28d結(jié)束實驗。監(jiān)測血流動力學(xué)參數(shù)，紅四氮唑(triphenyltetrazoliumchloride，TTC)法測定心肌梗死面積，免疫組化法觀察微血管數(shù)目，實時定量PCR檢測串珠素mRNA表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：缺血區(qū)邊緣注

5、射bFGF后，心肌梗死面積減小，微血管數(shù)目增加，心功能改善和串珠素表達增加。Westernbolt結(jié)果顯示，心肌梗死后bFGF+MI組缺血邊緣區(qū)粘著斑激酶(focaladhesionkinase，F(xiàn)AK)表達和p38MAPK磷酸化水平均較MI組上調(diào)，與串珠素表達變化趨勢一致，提示串珠素參與bFGF對缺血心肌的保護作用，其細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)涉及FAK和p38MAPK信號途徑。 2、在體外培養(yǎng)的大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞(vascularsm

6、oothmusclecells，VSMCs)上，觀察串珠素對于bFGF誘導(dǎo)VSMCs增殖反應(yīng)的影響及其相關(guān)信號分子的變化。結(jié)果顯示，串珠素加強bFGF引起的VSMCs增殖反應(yīng)，并誘導(dǎo)FAK表達上調(diào)。串珠素抗體消除串珠素促進bFGF致VSMCs增殖反應(yīng)，并抑制FAK表達。提示串珠素具有促進bFGF對VSMCs增殖作用，其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能與FAK有關(guān)。 結(jié)論：串珠素參與bFGF誘導(dǎo)缺血心肌組織內(nèi)的血管生成和心肌保護作用，其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機