Ghrelin對胰島素抵抗骨骼肌細(xì)胞質(zhì)游離鈣離子及Glut-4水平的影響.pdf

1、目的：
　　 近年來，2型糖尿病(T2DM)的發(fā)病率逐年增高，已經(jīng)逐漸成為嚴(yán)重的健康和社會問題。2型糖尿病的發(fā)病主要體現(xiàn)為胰島素抵抗及胰島細(xì)胞功能受損。Glut-4主要位于細(xì)胞內(nèi)，在脂肪和肌肉組織中轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖，鈣離子作為重要的細(xì)胞內(nèi)第二信使參與了該過程。肥胖是引起胰島素抵抗的重要危險因素，近年來研究發(fā)現(xiàn)Ghrelin與肥胖及胰島素抵抗有著密切關(guān)聯(lián)。Ghrelin是1999年日本科學(xué)家Kojima等首先從大鼠胃黏膜及下丘腦發(fā)現(xiàn)的一

2、種新的腦腸肽激素，由28個氨基酸組成，為生長激素促分泌激素受體的內(nèi)源性配體，主要由胃底X/A樣細(xì)胞分泌，可以調(diào)節(jié)進(jìn)食和糖代謝，對能量代謝平衡起著重要作用。大量文獻(xiàn)證實(shí):RYGB術(shù)后空腹Ghrelin明顯上升，對血糖的調(diào)控明顯改善。推測胰島素抵抗改善的機(jī)制可能與Ghrelin的調(diào)節(jié)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)選取骨骼肌細(xì)胞作為研究對象，著重研究胰島素抵抗的骨骼肌細(xì)胞質(zhì)鈣離子的變化及Ghrelin對鈣離子穩(wěn)態(tài)的維持作用，以及其引起的細(xì)胞內(nèi)Glut-4的變化

3、。有利于了解Ghrelin緩解胰島素抵抗的機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 培養(yǎng)、分化L6成肌細(xì)胞為成熟的骨骼肌細(xì)胞，建立胰島素抵抗模型。細(xì)胞隨機(jī)分組，以單純胰島素處理細(xì)胞作對照，棕櫚酸處理細(xì)胞作為研究對象，檢測胰島素抵抗形成過程中鈣離子的變化。以單純胰島素處理細(xì)胞作對照，棕櫚酸處理組、三種Ghrelin處理組為研究對象，分別采用葡萄糖氧化酶法、流式細(xì)胞儀、激光共聚焦顯微鏡，檢測Ghrelin對棕櫚酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗的緩

4、解作用、細(xì)胞質(zhì)游離鈣離子水平變化及Glut-4的水平變化。了解Ghrelin維持鈣穩(wěn)態(tài)、加強(qiáng)Glut-4水平，改善骨骼肌胰島素抵抗的機(jī)制。
　　 統(tǒng)計學(xué)處理：
　　 每組實(shí)驗(yàn)n=3，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(X)±s）表示，SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計，組間參數(shù)比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異具有顯著性。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 一、葡萄糖氧化酶法鑒定胰島素抵抗模型
　

5、　 0.3mmol/L棕櫚酸干預(yù)時間干預(yù)24小時后，上清中葡萄糖濃度明顯高于對照組(P＜0.05)，葡萄糖消耗量降低，說明棕櫚酸組骨骼肌細(xì)胞葡萄糖攝取能力明顯下降，證明棕櫚酸誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗成功。
　　 二、胰島素抵抗的骨骼肌細(xì)胞質(zhì)游離鈣離子的變化
　　 流式細(xì)胞儀檢測棕櫚酸作用24、36小時與未經(jīng)棕櫚酸作用的同組骨骼肌細(xì)胞質(zhì)陽性熒光鈣離子百分比相比較呈下降趨勢，差異具有顯著性(P＜0.05)，48小時差異不具

6、有顯著性(P＞0.05);棕櫚酸作用1、6、12小時與未經(jīng)棕櫚酸作用的同組骨骼肌細(xì)胞質(zhì)陽性熒光鈣離子百分比相比較呈升高趨勢，差異具有顯著性(P＜0.05)。
　　 三、Ghrelin對胰島素抵抗的骨骼肌細(xì)胞糖代謝的影響
　　 ?；疓hrelin處理組（AG組）、非?；疓hrelin處理組（UG組）、Obestatin處理組（OB組）培養(yǎng)基上清液葡萄糖濃度與棕櫚酸處理組（PA組）細(xì)胞上清液葡萄糖濃度相比較下降，差異具有顯著

7、性(P＜0.05)。
　　 四、Ghrelin對胰島素抵抗骨骼肌細(xì)胞質(zhì)游離鈣離子及Glut-4的影響
　　 經(jīng)三種Ghrelin作用的胰島素抵抗細(xì)胞與未經(jīng)Ghrelin作用的胰島素抵抗細(xì)胞相比較，細(xì)胞內(nèi)鈣離子上升，差異具有顯著性(P＜0.05)，同時細(xì)胞內(nèi)Glut-4水平上升，差異具有顯著性(P＜0.05)，且與鈣離子變化趨勢一致。
　　 結(jié)論：
　　 1、鈣離子參與骨骼肌細(xì)胞胰島素抵抗形成過程，胰島素抵