AML緩解期骨髓脂肪細(xì)胞異常及其形成機(jī)制的研究.pdf

1、目的:回顧性分析AML病人治療后緩解期和正常對照者骨髓活檢切片，定量分析骨髓脂肪細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特性，并分析其與AML患者預(yù)后的相關(guān)性。同時，初步探討AML緩解期骨髓異常脂肪細(xì)胞的形成機(jī)制，為白血病的早期干預(yù)和治療提供新方向。
　　方法:（1）AML緩解期患者和正常者的骨髓活檢組織石蠟包埋切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，識別骨髓脂肪細(xì)胞。運用自主研發(fā)的計算機(jī)網(wǎng)格計點法精確定量63例AML緩解患者和63例臨床診斷骨髓基本正常者的骨髓脂肪細(xì)胞的

2、含量、數(shù)量、單個脂肪細(xì)胞面積及直徑，并運用ROC曲線和Kaplan-Meier生存分析評估其和AML預(yù)后的相關(guān)性。（2）體外分離培養(yǎng)骨髓MSC,向脂肪細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化，將得到的脂肪細(xì)胞和從骨髓分離的單個核細(xì)胞均給予化療藥物阿糖胞苷（Ara-C）的干預(yù)，收集上清和細(xì)胞，觀察化療后上清對MSC來源的脂肪細(xì)胞功能的影響。（3）從基因水平和蛋白水平觀察化療藥物對骨髓單個核細(xì)胞功能的影響，篩選細(xì)胞上清中起作用的細(xì)胞因子,體外利用中和抗體阻斷實驗驗

3、證該因子的作用，從而初步探討AML緩解期異常脂肪細(xì)胞的形成機(jī)制。
　　結(jié)果:
　?。?）AML緩解期骨髓脂肪細(xì)胞的含量和單個脂肪細(xì)胞面積分別為18.0％±12.0%、1485.4±555.9μm2，均明顯高于正常對照者27.4%±10.5%、1920.4±374.5μm2（P<0.05）；此外，AML緩解患者骨髓脂肪細(xì)胞含量和單個脂肪細(xì)胞面積與其年齡、性別和身高體重指數(shù)（BMI）均無明顯的相關(guān)性（P>0.05）；
　　

4、（2）AML緩解期骨髓脂肪細(xì)胞的含量與RFS相關(guān)性分析中，ROC曲線下面積（AUC）為0.629，脂肪細(xì)胞含量達(dá)21.5%時，復(fù)發(fā)率明顯增高，無復(fù)發(fā)生存期明顯縮短（P<0.05）；與OS相關(guān)性分析中，ROC曲線下面積（AUC）為0.636，脂肪細(xì)胞含量達(dá)22.5%時，死亡率明顯增高，總生存期明顯縮短（P<0.05）；AML緩解期骨髓單個脂肪細(xì)胞面積與RFS相關(guān)性分析中，ROC曲線下面積（AUC）為0.515，其界值為986.5μm2，但

5、單個脂肪細(xì)胞面積大于986.5μm2與≤986.5μm2組的無復(fù)發(fā)生存期無明顯差異（P>0.05）；與OS相關(guān)性分析中，ROC曲線下面積（AUC）為0.523，其界值為1236.5μm2，但單個脂肪細(xì)胞面積大于1236.5μm2與≤1236.5μm2組的總生存期無明顯差異（P>0.05）；
　?。?）AML緩解患者和正常者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）的形態(tài)、表面標(biāo)記及體外成脂成骨能力均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；化療后單個核細(xì)胞上

6、清明顯抑制成脂（P<0.05），但脂肪細(xì)胞化療后上清對MSC的成脂能力無明顯影響（P>0.05）；（4）骨髓單個核細(xì)胞的化療6h后的Leptin、GH和CTGF的mRNA表達(dá)量顯著增高，而Resistin、LRP16和S100A16沒有明顯變化，但蛋白水平只有CTGF的蛋白含量較化療前明顯增多。體外加入CTGF的中和抗體后，化療后骨髓單個核細(xì)胞上清抑制成脂的過程被阻斷。
　　結(jié)論:
　?。?）AML緩解期骨髓脂肪細(xì)胞存在異常