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文檔簡介
1、目的:組織纖溶酶原激活酶(tissue plasminogen activator,tPA)是目前唯一經(jīng)過美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用于急性腦卒中的溶栓藥物,然而由于tPA的時(shí)間窗狹窄以及增加了腦出血的風(fēng)險(xiǎn)等原因,應(yīng)用患者比例非常小。硫化氫(hydrogen sulfide,H2S)是繼一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)后人們發(fā)現(xiàn)的第三個(gè)重要的內(nèi)源性氣體信號分子。本課題研究目的是探究硫化氫是否具有減輕腦缺血后tPA導(dǎo)致的腦出血的
2、作用。
方法:利用雄性 C57/BL6J小鼠,通過大腦中動脈堵塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO),建立腦缺血模型。術(shù)前15分鐘腹腔注射葡萄糖(6 ml/kg,50%w/v)。缺血2小時(shí),再灌注后,立即股靜脈注射tPA或生理鹽水(4 ml/kg),腹腔注射硫化氫供體或溶劑。小鼠隨機(jī)分為Sham組(假手術(shù)組),Control組(MCAO+saline+vehicle),tPA組(MCA
3、O+tPA+vehicle),tPA+NaHS組(MCAO+tPA+NaHS),tPA+ADT組(MCAO+tPA+ADT),tPA+ADT-OH組(MCAO+tPA+ADT-OH)。利用血紅蛋白檢測試劑盒,檢測MCAO后24小時(shí)腦中血紅蛋白含量變化;利用TTC(2,3,4-氯化三苯基四氮唑)染色的方法,檢測小鼠MCAO后1天及7天的腦梗死體積;利用檢測伊文思藍(lán)(evans blue,EB)滲透的方法,檢測血腦屏障破壞程度;利用稱重法檢
4、測小鼠MCAO后24小時(shí)腦水腫程度;利用神經(jīng)功能評分、轉(zhuǎn)角實(shí)驗(yàn)以及轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)檢測MCAO后連續(xù)7天的小鼠神經(jīng)功能恢復(fù)情況;利用明膠酶譜的方法,檢測 MMP-9活性變化;利用亞甲基藍(lán)方法,檢測小鼠血液H2S水平。
結(jié)果:與 Sham組及 Control組相比,tPA組小鼠缺血側(cè)腦半球組織中血紅蛋白(hemoglobin)含量明顯上升,證明腦缺血后tPA導(dǎo)致腦出血。H2S供體NaHS,ADT及ADT-OH減輕了tPA引起的腦出血。A
5、DT-OH減輕了缺血后tPA加劇的缺血側(cè)腦組織中伊文思藍(lán)(evans blue,EB)滲透及水腫的加重,證明H2S供體抑制了腦缺血后tPA對血腦屏障的破壞。根據(jù)MCAO后連續(xù)7天的神經(jīng)功能損傷評分(mNSS),轉(zhuǎn)角測試和轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)測試,結(jié)果顯示,ADT-OH減輕了MCAO及tPA處理導(dǎo)致的小鼠神經(jīng)功能損傷。ADT-OH對MCAO及tPA處理后1天的梗死體積影響不大,但是減輕了MCAO及tPA處理后第7天tPA導(dǎo)致的梗死體積增加。明
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