Notch3蛋白抑制劑通過激活固有凋亡途徑與紫杉醇在非小細胞肺癌中的協(xié)同效應(yīng).pdf

1、目的：肺癌是目前人類高發(fā)的腫瘤之一，其中非小細胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）是其主要類型。雖然有手術(shù)，多種化療藥物及靶向治療應(yīng)用于其治療，但是其預(yù)后仍然很差。Notch3蛋白在NSCLC中表達明顯高于正常肺組織，并且與NSCLC的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。肺癌患者因個體化差異對常規(guī)化學(xué)藥物治療具有一定的耐藥性，例如紫杉醇和吉西他濱等。而且，Notch信號在肺癌細胞的化學(xué)耐藥性中是至關(guān)重要的。因

2、此，本研究探索Notch3蛋白在非小細胞肺癌中是否與紫杉醇敏感性有關(guān)，并且探討Notch3抑制劑是否通過激活凋亡途徑提高紫杉醇的化療敏感性。
　　方法：本研究培養(yǎng)A549和H1299細胞，分別檢測兩種細胞對紫杉醇的敏感性，根據(jù)其對紫杉醇的敏感性，分別加入含一定不同濃度的紫杉醇長時間培養(yǎng)后，用Western blot的方法分別檢測兩種細胞中Notch3蛋白的表達，與未處理細胞進行比較。同時采用MTT方法檢測Notch3-siRNA和

3、特殊抑制劑GSI（gamma-secretase inhibitor，GSI）協(xié)同紫杉醇較單純應(yīng)用紫杉醇及對照組對兩種細胞增殖的影響。繼而用流式細胞儀檢測兩種抑制劑協(xié)同紫杉醇對這兩種肺癌細胞的凋亡作用。繼而繼續(xù)應(yīng)用克隆形成的方法分別檢測兩種細胞經(jīng)不同的預(yù)處理后細胞的克隆形成能力。同時，分別用兩種抑制劑處理細胞后，經(jīng)Westernblot的方法分別檢測兩種細胞中Notch3蛋白和NICD3（Notch intracellular doma

4、in3，NICD3）以及凋亡相關(guān)蛋白的表達水平，并比較不同組之間的表達水平。
　　結(jié)果：Notch3蛋白在兩種細胞系中顯著過表達，并且在紫杉醇處理后Notch3表達升高，表明Notch信號傳導(dǎo)途徑的活化。經(jīng)Notch3-siRNA處理后，紫杉醇的IC50較對照組明顯下降并且經(jīng)GSI處理后，兩種細胞較單純加入紫杉醇組在24h，48h及72h后，細胞增殖明顯減少。經(jīng)兩種抑制劑處理后細胞的凋亡作用明顯增加及克隆形成能力明顯下降。同時，兩

5、種抑制劑明顯調(diào)控凋亡蛋白的表達從而影響了紫杉醇對細胞的作用。Notch3 siRNA和GSI明顯降低了Notch3蛋白和NICD3的表達水平。GSI或siRNA處理后伴隨著Bcl-2表達下調(diào)和Bax表達水平上調(diào)。
　　結(jié)論：這些結(jié)果表明Notch3蛋白特異性抑制劑調(diào)控凋亡途徑，從而改變紫杉醇誘導(dǎo)的NSCLC細胞中Notch3蛋白的增加而導(dǎo)致的化學(xué)抗性。這種結(jié)合Notch3蛋白特異性抑制和紫杉醇的方法將可能應(yīng)用于NSCLC的治療。N