SOX2轉(zhuǎn)錄激活PD-L1在促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、分類號U D C密級編號角方霜糾博士學(xué)位論文S O X 2 轉(zhuǎn)錄激活P D ．L 1 在促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制研究T r a n s c r i p t i o n a la c t i v a t i o no f P D —L 1 b yS O X 2c o n t r i b u t e s t ot h e p r o l i f e r a t i o no f h e p a t o c e l l u l a r

2、c a r c i n o m a c e l l s導(dǎo) 師 姓 名專 業(yè) 名 稱培 養(yǎng) 類 型論文提交日期鐘 鋒周 杰肝膽外科專業(yè)型博士2 0 1 7 ．0 3 ．2 8ll●●i■■■_ ㈣2 川3 jjjj●I 川8 ㈣2 ㈣3 ⅢY博士學(xué)位論文S O X 2 轉(zhuǎn)錄激活P D —L 1 在促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制研究摘要目的：探討S O x 2 和P D —L 1 在肝癌中的表達(dá)、功能以及S O X 2 轉(zhuǎn)錄激活P D ．

3、L 1在促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制。方法：采用實(shí)時熒光定量核酸擴(kuò)增實(shí)驗、免疫印跡實(shí)驗和免疫組化染色檢測S O X 2 和P D —L 1 在肝癌組織和癌旁組織中的表達(dá)。采用實(shí)時熒光定量核酸擴(kuò)增實(shí)驗、免疫印跡實(shí)驗和免疫熒光檢測S O X 2 和P D ．L 1 在三種肝癌細(xì)胞系和正常肝細(xì)胞系中的表達(dá)。利用s i R N A 的方法敲低S O X 2 在兩種S O X 2 高表達(dá)肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)，并比較在敲低S O X 2 基因前后

4、這兩種細(xì)胞系的增殖能力和細(xì)胞凋亡狀態(tài)。通過實(shí)時熒光定量核酸擴(kuò)增和免疫印跡實(shí)驗驗證S O X 2 在S O X 2特定s i R N A 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá)是否減少，利用C C K 8 和E d U 染色評估S O X 2 缺失對細(xì)胞增殖的影響。使用T R A N S F A C 數(shù)據(jù)庫研究P D —L 1 啟動子區(qū)域內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子S O X 2 結(jié)合位點(diǎn)，在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游．7 5 7 b p 處發(fā)現(xiàn)了一個一致性S O X 2基序后，做關(guān)于包

5、含啟動子區(qū)域的S O X 2 基序的電泳遷移率實(shí)驗和染色質(zhì)免疫定量P C R 實(shí)驗來探討S O X 2 是否直接通過S O X 2 基序結(jié)合到P D —L 1 的基因啟動子區(qū)。利用熒光素酶報告基因?qū)嶒炦M(jìn)一步驗證S O X 2 是否通過上述S O X 2 結(jié)合位點(diǎn)激活P D ．L 1 的調(diào)節(jié)區(qū)域。結(jié)果：不論是在m R N A 水平還是在蛋白質(zhì)水平，S O X 2 和P D ．L 1 在肝癌組織中的表達(dá)都顯著高于癌旁組織，二者的m R N