基于TRPV1通路挖掘桑菊飲治療咳嗽的作用機制和配伍機理.pdf

1、研究目的:
　　桑菊飲是中醫(yī)經典著作《溫病條辨》中著名的方劑，由:桑葉、菊花、連翹、薄荷、生甘草、蘆根、杏仁和桔梗配伍組成，具有疏風清熱，宣肺止咳的功效。臨床上常應用于治療外感咳嗽、急性支氣管炎、上呼吸道感染、肺炎等屬風熱犯肺或肝經風熱癥等呼吸系統(tǒng)疾病?，F(xiàn)代藥理研究表明桑菊飲具有明顯的抗炎、抑菌、抗氧化及保護線粒體、抗急性肺損傷、解熱發(fā)汗、抑制腸蠕動和提高免疫功能等作用，但其藥效學及臨床研究還不夠深入，作用機制尚不明確。
　

2、　本文采用辣椒素誘導小鼠咳嗽模型，對桑菊飲的止咳作用及其機制進行了初步探討，并通過桑菊飲拆方給藥挖掘其配伍機理，為桑菊飲的臨床應用和進一步的開發(fā)提供科學依據(jù)。
　　研究方法:
　　SPF級昆明小鼠，采用0.1 mmol·L-1的辣椒素噴霧法復制小鼠咳嗽模型，咳嗽小鼠模型成功建立后，將小鼠隨機分為模型對照組，桑菊飲全方及其拆方治療組分為三個劑量組，分別為高劑量（相當于等效劑量的5倍）、中劑量（相當于等效劑量的2倍）和低劑量（相

3、當于等效劑量），另設健康小鼠為正常組，每組10只。造模3d后，正常組和模型組隨機選取3只小鼠處死，取出氣管支氣管黏膜及三叉神經節(jié)組織，采用HE染色法檢查小鼠氣管支氣管組織病理變化，采用ELISA法檢測三叉神經節(jié)組織中SP的釋放量變化。其余各組小鼠第4d開始灌胃給藥，每日1次，連續(xù)治療5d，正常組及模型組小鼠灌胃生理鹽水0.5 mL/d。觀察各組小鼠的狀態(tài)變化，治療5d后，第6d上午所有小鼠以0.1 mmol·L-1的辣椒素噴霧引咳，記錄

4、小鼠咳嗽次數(shù)，所有小鼠眼眶取血、取出氣管支氣管及三叉神經節(jié)組織，采用RT-PCR法檢測氣管支氣管組織中TRPV1mRNA的表達量變化，Western Blot法測定各組小鼠氣管支氣管組織中TRPV1蛋白的表達變化，ELISA法檢測三叉神經節(jié)中SP的釋放量的變化。
　　研究結果:
　　造模后，小鼠出現(xiàn)好動、煩躁等癥狀，咳嗽次數(shù)明顯增加，HE染色結果顯示，其氣管支氣管黏膜組織出現(xiàn)炎癥變化，與正常組相比，模型組三叉神經節(jié)中SP的含

5、量增加且有顯著性差異（P＜0.05），提示造模成功。同時，與正常組相比，模型組的氣管支氣管中TRPV1mRNA及TRPV1蛋白的表達增加量有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。經桑菊飲全方及拆方干預后，與模型組相比，桑菊飲全方高、中劑量組小鼠的咳嗽次數(shù)明顯減少（P＜0.05），三叉神經節(jié)中SP的含量較模型組有顯著降低（P＜0.05或P＜0.01)，氣管支氣管中TRPV1基因和蛋白的表達量較模型組均有不同程度的下調（P＜0.05或P

6、＜0.01），且中劑量組效果最佳，而全方低劑量組沒有明顯的治療效果。桑菊飲拆方各組與模型組相比，咳嗽次數(shù)未見明顯變化，SP釋放量、氣管支氣管中TRPV1基因和蛋白的表達量部分有降低的趨勢，但不具有統(tǒng)計學意義。
　　研究結論:
　　1、本實驗建立的辣椒素噴霧造模法成功復制了小鼠咳嗽模型。
　　2、桑菊飲全方高、中劑量組可減輕模型小鼠的咳嗽癥狀，下調TRPV1受體基因和蛋白的表達水平，降低三叉神經節(jié)中SP含量，中劑量較高劑