AQP3在乳腺癌的表達及RUNX2對其轉錄調控研究.pdf

1、乳腺癌目前已經(jīng)成為世界上女性最常見的惡性腫瘤，了解乳腺癌的侵襲、增殖與細胞轉移機制顯得非常重要，為發(fā)現(xiàn)可能、有效的抗腫瘤治療提供幫助。水通道蛋白（AQPs）是一類小的完整的膜蛋白，廣泛分布于生物體，其中在哺乳動物已經(jīng)確定有13種（AQP0-12）。AQP3是其成員之一，廣泛分布于人體內腎集合管、表皮組織、眼結膜和乳腺組織。據(jù)報道，AQP3可通過水和甘油運輸形成板狀偽足從而促進細胞遷移，并通過維持細胞內高水平的甘油以便生成ATP和脂類，從

2、而導致細胞增殖。動物實驗顯示缺乏 AQP3引起尿濃縮功能缺陷、皮膚傷口愈合及消化道粘膜修復延遲，相反，上調 AQP3表達，促進了腫瘤的形成和進展。近年來的研究表明，AQP3過表達與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展如皮膚鱗癌、口腔鱗癌、肺腺癌、胃腺癌等關系密切。Runx2是PEBP2/CBF轉錄因子家族的成員，在乳腺癌和前列腺癌等惡性腫瘤中 Runx2的表達顯著升高，而細胞的轉化以及腫瘤的進展與其高表達關系密切。Runx2與惡性腫瘤活化的通路P13K/

3、AKT-MAPK/ERK以及TGF-β-Smads通路聯(lián)系緊密，這些通路被激活是啟動惡性腫瘤侵襲與轉移的關鍵環(huán)節(jié)。在我們的前期研究中，應用FGF-2誘導MDA-MB-231細胞，可以觀察到細胞侵襲性增加，Runx2及AQP3表達增加，慢病毒沉默Runx2后發(fā)現(xiàn)AQP3表達減少，并且發(fā)現(xiàn)FGF-2誘導的AQP3表達經(jīng)由PI3K及ERK通路。然而，AQP3在乳腺癌組織的表達以及臨床意義尚不十分明確，Runx2作為轉錄因子，對AQP3基因是否

4、存在相互作用及作用特點尚不明確。本論文主要研究AQP3在乳腺癌的表達特點以及Runx2對AQP3基因的轉錄調控特點，結合前期研究明確Runx2調控的AQP3表達在FGF-2誘導的乳腺癌侵襲中的作用。
　　本文通過免疫組化技術研究 AQP3表達水平與乳腺癌患者臨床病理特點與預后的相關性，明確了AQP3的表達與乳腺癌患者的預后呈負相關。應用染色質免疫沉淀(ChIP)技術證實Runx2與AQP3啟動子在MDA-MB-231細胞內存在結合

5、，利用PCR技術檢測鑒定結合的DNA片段。為了確認Runx2對AQP3基因的轉錄活性，我們構建了PGL3-Basic-AQP3-Promoter熒光素酶報告基因，重組質粒轉染MDA-MB-231細胞，檢測報告基因熒光素酶活性，發(fā)現(xiàn)下調Runx2的表達導致AQP3轉錄水平下降，上調Runx2的表達導致AQP3轉錄水平上升。
　　綜上所述，AQP3的表達影響乳腺癌患者的預后。細胞學實驗中，ChIP實驗證實Runx2對AQP3基因存在相