凝集素化量子點的制備表征及其在肝癌診斷中的應用.pdf

1、目的：制備并表征光學性能優(yōu)良的凝集素化量子點熒光探針并研究其在肝癌診斷中的應用。
　　方法：
　　1.量子點的合成與表征：水相兩步合成一系列粒徑不同的水溶性量子點，采用紫外、熒光光譜表征量子點的光學特性并從制備的水溶性量子點中選取光學性能良好的呈現(xiàn)綠色和紅色的量子點（QD550和QD618）做后續(xù)研究；同時采用MTT法評價量子點的細胞毒性和篩選后續(xù)實驗安全的量子點濃度。
　　2.凝集素化量子點的制備表征：利用量子點表面

2、的羧基和凝集素上的氨基通過共價偶聯(lián)的方式制備凝集素化量子點熒光探針；采用瓊脂糖凝膠電泳表征曼陀羅凝集素（DSA）和扁豆凝集素（LCA）兩種凝集素是否分別與量子點QD550和QD618偶聯(lián)成功；利用紫外和熒光光譜考察凝集素化量子點熒光探針的光學性質；采用兔血紅細胞凝集試驗、糖-凝集素抑制實驗考察DSA和LCA與QD550和QD618偶聯(lián)前、后的生物活性；采用MTT法評價凝集素化量子點對HepG2和LO2細胞的毒性。
　　3.兩種凝集

3、素化量子點熒光探針特異性靶向標記HepG2細胞表面糖類復合物的研究：選取人肝癌細胞HepG2為細胞模型，熒光顯微鏡下成像，直觀定性表征兩種凝集素化量子點對HepG2細胞的標記情況；同時結合對照實驗和凝集素競爭結合實驗考察兩種凝集素化量子點熒光探針特異性靶向標記HepG2細胞表面不同糖類復合物表達情況。選取HepG2細胞和正常肝細胞LO2細胞為細胞模型，運用流式細胞術定量分析上述兩種細胞表面表達的糖復合物，并比較HepG2細胞和LO2細胞

4、表面表達的糖復合物的差異，從而評價兩種凝集素化量子點熒光探針對肝癌細胞的診斷效力。
　　結果：優(yōu)化的量子點的合成條件是：反應原料的最佳比例是Cd2+:Te:NaBH4=1:0.5:10，最適溫度為98℃，pH值為10.5。在優(yōu)化的反應條件下合成了量子產(chǎn)率是28.9％，粒徑分布均勻，直徑約2～3nm，熒光穩(wěn)定性較好的水溶性量子點；將綠色量子點（QD550）和紅色量子點（QD618）分別與DSA和LCA共價結合成功制得兩種凝集素化量子

5、點熒光探針QD550-DSA和QD618-LCA；經(jīng)紫外和熒光光譜結果表明量子點和凝集素共價結合后，凝集素化量子點基本保持了原有量子點的光學性質；兔血紅細胞凝集實驗證實，凝集素的生物活性也沒有受到影響，且MTT結果表明QD550-DSA和QD618-LCA對正常肝細胞和肝癌細胞的毒性均較低；熒光顯微鏡結果顯示：凝集素化量子點熒光探針能直觀熒光標記HepG2細胞上特異性表達的糖類復合物；流式細胞術分析結果表明，凝集素化量子點熒光探針與He

6、pG2細胞表面的結合較裸量子點顯著性增高，差異有統(tǒng)計學意義（p＜0.01），且當HepG2細胞被加入的凝集素預飽和后，探針與HepG2細胞表面的結合較沒有被凝集素飽和的高，有顯著性差異（p＜0.05），說明兩種凝集素化量子點熒光探針與肝癌細胞的結合是具有特異性的，且HepG2細胞表面的N-乙酰葡糖胺的含量是LO2細胞的1.64倍有統(tǒng)計學意義（p＜0.05），甘露糖的含量是LO2 細胞的1.82倍，有統(tǒng)計學意義（p＜0.01），