

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、骨髓基質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是干細胞家族的主要成員,其最初在骨髓被發(fā)現(xiàn),它具有多項功能諸如,分化潛能,造血支持,免疫調(diào)節(jié)等。其增殖和分化為現(xiàn)如今的熱點。在1999年,Ghrelin被日本學者Kojima等發(fā)現(xiàn)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),它是由28個氨基酸殘基組成,分子量為3.3KD。Ghrelin是生長激素促分泌素受體(Growth hormone secretagogue rec
2、eptor, GHS-R)的內(nèi)源性配體,當它與其受體GHS-R結(jié)合后會產(chǎn)生具有很強的促進生長激素(Growth hormone, GH)釋放的作用。對MAPK途徑的研究主要表現(xiàn)在哺乳動物細胞中的研究,其主要方法是過表達、失活、基因沉默等方法。MAPK信號通路主要有4種類型,用它們的核心命名為MAPK。多種生理活動的調(diào)節(jié)均由其參與。每條通路都可以和其它通路相整合交叉,細胞的命運主要由他們的信號強弱及活化程度決定。
目的:本研究就
3、ghrelin對兔BMSCs(rBMSCs)的增殖與分化的作用,及ghrelin通過哪種途徑來實現(xiàn)對兔BMSCs的增殖與分化的作用機制進行研究。
方法:從健康清潔新西蘭大白兔體內(nèi)分離純化得到rBMSCs。傳代后免疫熒光檢測rMSCs細胞標記物CD44、CD34的表達,用MTT檢測不同代的rMSCs在10天內(nèi)的生長情況,從而得到最佳的生長時間。利用MTT法檢測不同濃度的Ghrelin對rMSCs的增殖作用,從而找到ghrelin
4、對rMSCs的增殖作用的最佳的作用濃度與作用時間。用western blot的方法來檢測Ghrelin對rMSCs不同時間點的MAPK通路的關(guān)鍵蛋白(ERK1/2,p38和JNK)的磷酸化情況,來研究Ghrelin發(fā)揮其作用的主要通路。為了進一步研究Ghrelin對rMSCs增殖的作用,將MAPK通路的關(guān)鍵蛋白進行抑制,用western blot來檢測其下游蛋白的磷酸化情況,及細胞增殖情況。同時用ghrelin受體抑制劑作用于細胞,用w
5、estern blot方法檢MAPK通路的關(guān)鍵蛋白(ERK1/2,p38和JNK)的磷酸化情況,用MTT法檢測細胞增殖情況。同時用ghrelin對rBMCs向成骨細胞分化的影響進行研究。用western blot檢測加入ghrelin后成骨細胞標志因子ALP,Runx2和Osterix的表達情況,同時檢測MAPK通路的關(guān)鍵蛋白( ERK1/2,p38和JNK)的磷酸化情況,來確定ghrelin對rBMCs向成骨細胞分化影響的作用機制。用
6、MAPK通路的關(guān)鍵蛋白的抑制劑作用于細胞,及ghrelin受體抑制劑作用于rBMCs向成骨細胞分化的過程,在分別檢測ALP,Runx2和Osterix的表達情況。
結(jié)果:由新西蘭大白兔提rMSCs,經(jīng)培養(yǎng)得到較純的細胞,其在第四代的生長最佳,且CD44有強烈表達,而CD34則沒有表達。Ghrelin對rMSCs有明顯的促進生長的作用。Ghrelin對rMSCs的最佳作用濃度為600ng/ml,作用時間為第三天。用600ng/m
7、l的ghrelin作用于rBMCs并于0,20,40和60min后,磷酸化的ERK1/2的表達量在ghrelin作用后隨著作用時間的增加而增加(P<0.05)。且在40min時達到量高而后保持不變(P<0.05)。說明ghrelin對rBMCs的作用是通過ERK1/2通路起作用的。為了進一步證明ERK1/2通路的做用,用ERK1/2磷酸化抑制劑U0126作用細胞,發(fā)現(xiàn)ghrelin對細胞的促進生長作用消失。當細胞在600ng/ml Gh
8、relin的作用下,加入ghrelin受體抑制劑,抑制了細胞的生長。從而說明在Ghrelin促進rMSCs生長增殖時也是Ghrelin首先與其受體結(jié)合然后才發(fā)揮的促進作用的。在本研究中將ALP,Runx2和Osterix作為rBMSCs向成骨細胞分化的檢測指標,結(jié)果表明在ghrelin存在的情況下,ALP,Runx2和Osterix的表達量升高,更有利于rBMSCs向成骨細胞分化。為了進一步研究ghrelin促進rBMSCs向成骨細胞分
9、化的作用機制,本研究對MAPK通路的主要蛋白ERK1/2,JNK和p38磷酸化情況進行了檢測。結(jié)果表明ghrelin促進rBMSCs向成骨細胞分化主要是通過ERK1/2通路來實現(xiàn)的,為了進一步證明此機制,我們用ERK1/2磷酸化抑制劑U0126作用于rBMSCs,結(jié)果表明ERK1/2磷酸化被抑制,而ALP,Runx2和Osterix這三種蛋白的表達量均顯著下降,且低于只加地塞米松組的表達量,說明rBMSCs向成骨細胞分化過程減慢。進一步
10、證明了ghrelin促進rBMSCs向成骨細胞分化主要是通過ERK1/2通路來實現(xiàn)的。為了證明ghrelin促進rBMSCs向成骨細胞分化的實現(xiàn)是ghrelin先與其受體結(jié)合然后才發(fā)揮其作用的,本研究還用ghrelin受體抑制劑作用于rBMSCs后磷酸化的ERK1/2,JNK,P38的表達量在不同的時間段均沒有發(fā)生明顯的變化。同時檢測了細胞中ALP,Runx2和Osterix的表達量也沒有變化。表明ghrelin的促進作用受到抑制。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 雌二醇通過Wnt信號通路調(diào)節(jié)大鼠BMSCs成骨分化機制研究.pdf
- Ghrelin通過MAPK-ERK信號通路抑制血管平滑肌細胞向成骨樣細胞分化的作用機制研究.pdf
- 成骨誘導的兔BMSCs體內(nèi)、外成骨特性的實驗研究.pdf
- 純鈦表面WNT信號通路調(diào)控BMSCs成骨分化的機制研究.pdf
- Stathmin通過Shh信號通路調(diào)控人牙髓干細胞增殖與成骨-成牙向分化機制的研究.pdf
- 間斷性牽張力經(jīng)由p38MAPK-osterix信號通路促進小鼠BMSCs成骨向分化.pdf
- 研究黑升麻提取物通過ER-NO-cGMP信號通路對大鼠BMSCs成骨分化的影響.pdf
- miR-210誘導犬BMSCs成血管及成骨向分化的體外實驗研究.pdf
- 羥基紅花黃色素A促進激素誘導兔骨髓基質(zhì)細胞成骨分化及其MAPK信號轉(zhuǎn)導機制的研究.pdf
- Fgfr2S252W-+小鼠骨量、骨結(jié)構(gòu)特性及BMSCs成骨分化調(diào)控機制的研究.pdf
- 補腎活血湯誘導BMSCs成骨分化研究及治療粗隆間骨折術(shù)后的觀察.pdf
- 淫羊藿次苷Ⅱ通過p38MAPK信號通路調(diào)控成骨細胞護骨素表達和成骨分化研究.pdf
- 大鼠BMSCs體外誘導成脂、成骨分化中BMP-2、GPNMB表達的實驗研究.pdf
- miR-141調(diào)控OP小鼠BMSCs成骨分化機制及健骨顆粒干預作用研究.pdf
- BMP9需通過調(diào)控Notch信號通路誘導間充質(zhì)干細胞成骨分化及其作用機制研究.pdf
- 葉酸通過MAPK信號通路對神經(jīng)干細胞增殖分化作用的研究.pdf
- 大鼠BMSCs成骨誘導及復合支架構(gòu)建組織工程骨的研究.pdf
- PLGA仿生礦化及其對大鼠BMSCs粘附增殖和成骨分化影響的實驗研究.pdf
- BMP-2誘導成骨分化過程與Wnt-β-catenin通路的串話機制研究.pdf
- 生長分化因子-5誘導人黃韌帶細胞成骨分化的作用及機制.pdf
評論
0/150
提交評論