高脂環(huán)境下大鼠BMSCs成骨分化過程中Wnt通路相關因子的表達變化.pdf

1、背景:
　　高脂血癥與骨質疏松癥發(fā)病率日益增加，眾多研究表明兩者聯系密切，然而兩者之間的具體發(fā)病機制仍不清楚。Wnt信號通路為近年來骨代謝研究熱點。
　　目的:
　　觀察高脂環(huán)境下大鼠骨髓基質干細胞(BMSCs)成骨分化過程中Wnt信號通路相關因子的表達變化，以期探討高脂血癥導致骨質疏松的可能機制。
　　方法:
　　Wistar大鼠BMSCs進行培養(yǎng)及傳代，采用第三代細胞用于實驗。待第三代細胞融匯至80％后

2、，實驗分為兩組:高脂組、對照組，每組有三個樣本，兩組細胞向成骨誘導期間倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)變化;成骨誘導5天、7天、14天堿性磷酸酶(ALP)活性檢測觀察兩組BMSCs早期成骨細胞分化情況;28天茜素紅染色觀察細胞外基質礦化能力;成骨誘導14天油紅O染色觀察兩組BMSCs成脂分化情況;成骨誘導培養(yǎng)7天、14天、21天采用RT-PCR檢測兩組細胞Wnt信號通路相關因子Wnt3a、LRP5、β-catenin、sFRP1 mRNA的表達

3、，以及脂肪代謝因子PPAR-γmRNA的表達;同時7天、14天、21天Western Bolt檢測兩組細胞β-catenin的蛋白表達量。SPSS17.0對數據進行統計分析。
　　結果:
　　BMSCs培養(yǎng)到第三代，細胞形態(tài)趨于一致。ALP活性檢測顯示其活性隨時間延長而增大，但增長速度減慢，7天、14天高脂組活性均低于對照組。茜素紅染色結果顯示對照組鈣結節(jié)量形成多于高脂組。油紅O結果顯示高脂組中紅染的脂肪細胞多于對照組。RT

4、-PCR結果顯示在7天時sFRP1、PPAR-γ表達量對照組低于高脂組，差異有顯著意義(p＜0.01)，14天時Wnt3a、β-catenin表達量對照組高于高脂組(p＜0.05)，sFRP1、PPAR-γ表達量對照組低于高脂組，差異有意義(p＜0.01)，21天時LRP5、β-catenin表達量對照組高于高脂組，有統計學意義(p＜0.01)。Western Blot結果顯示，在第14天、21天高脂組較對照組β-catenin蛋白的表

5、達明顯下調，差異有統計學意義(p＜0.05)。
　　結論:
　　1.高脂環(huán)境下BMSCs向成骨細胞分化減少。
　　2.不同時間段Wnt信號通路相關因子的表達變化不一致，成骨分化早期sFRP1起作用，成骨分化中期Wnt3a起作用，β-catenin在成骨分化中末期發(fā)揮效應，LRP5在成骨分化末期變化顯著，其具體原因需進一步探討。
　　3.Wnt信號通路參與BMSCs成骨細胞分化過程中，其相關因子之間聯系密切，高脂環(huán)