再生障礙性貧血患者異基因造血干細(xì)移植術(shù)后骨髓niche變化的臨床及基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)旨在比較研究AA患者骨髓血管niche（ Vasc ular nic he）、血管旁nic he（Perivascular niche）及成骨niche（Osteoblastic niche）與對照組有無差異，并對allo-HSCT后AA患者骨髓 niche是否有改變進(jìn)行觀察，并初步探討移植后AA患者骨髓niche改變的原因，為研究AA骨髓niche提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，亦為探討AA的發(fā)病機(jī)制提供研究基礎(chǔ)。
　　方

2、法：
　　取46例初診AA患者和15例對照組骨髓活檢標(biāo)本，進(jìn)行抗CD34、CD146和Osteopontin免疫組化染色，分別計(jì)數(shù)CD34+血管內(nèi)皮細(xì)胞、CD146+血管旁細(xì)胞和Osteopontin+骨內(nèi)膜下細(xì)胞，比較 AA患者骨髓 niche與對照組骨髓 niche靶細(xì)胞數(shù)有無差異。其中 CD34+血管內(nèi)皮細(xì)胞、CD146+血管旁細(xì)胞、Osteopontin+骨內(nèi)膜下細(xì)胞分別代表血管niche、血管旁niche、成骨niche

3、。24例AA患者接受allo-HSCT，分別在移植后+1m、+2m、+3m、+6m和+12m取骨髓標(biāo)本，通過免疫組化染色檢測骨髓niche靶細(xì)胞數(shù)較移植前是否有改變；用骨髓MSCs培養(yǎng)、STR-PCR和ELISA方法，檢測骨髓MSCs DNA指紋圖、骨髓細(xì)胞因子水平，推測引起AA患者a llo-HSC T后骨髓nic he改變的可能原因。
　　結(jié)果：
　　1.46例初診AA患者骨髓niche與對照組相比，每個高倍視野CD34

4、+血管內(nèi)皮細(xì)胞（8.00 vs12.67）、CD146+血管旁細(xì)胞（7.17 vs10.67）及Osteopontin+骨內(nèi)膜下細(xì)胞（0.33 vs3.67）均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.24例移植的 AA患者 C D34+血管內(nèi)皮細(xì)胞、C D146+血管旁細(xì)胞及Osteopontin+骨內(nèi)膜下細(xì)胞數(shù)分別為7.30±3.51、6.68±3.59、0.90±1.85，均明顯低于對照組12.22±3.85、1

5、2.53±5.43、4.95±4.58，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。移植后第1月 CD34+血管內(nèi)皮細(xì)胞和 CD146+血管旁細(xì)胞數(shù)分別為12.75±3.94、10.84±4.65，與移植前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P<0.05）,而與對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），即骨髓血管nic he和血管旁nic he細(xì)胞數(shù)有修復(fù)；Osteopontin+骨內(nèi)膜下細(xì)胞1.69±1.56，較移植前有增高，但與移植前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,

6、即成骨niche無修復(fù)。在allo-HSCT后第2月，CD34+血管內(nèi)皮細(xì)胞和CD146+血管旁細(xì)胞數(shù)達(dá)高峰，分別為15.67±6.81、14.55±7.19，與移植前差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Osteopontin+骨內(nèi)膜下細(xì)胞數(shù)1.79±2.66，但與移植前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。第3、6、12月，骨髓CD34+血管內(nèi)皮細(xì)胞和CD146+血管旁細(xì)胞數(shù)均較移植前升高，其中CD

7、34+血管內(nèi)皮細(xì)胞和CD146+血管旁細(xì)胞數(shù)與移植前差異仍然有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但 Osteopontin+骨內(nèi)膜下細(xì)胞與移植前差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.共分析21例次allo-HSCT后AA患者骨髓MSCs DNA指紋圖，供者源骨髓MSCs嵌合率1.93％±1.19%，且均小于5%。
　　4.與移植前相比，正性調(diào)控細(xì)胞因子VEGF、SDF-1α移植后升高，其中VEGF升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；負(fù)性調(diào)控

8、因子OPN、TNF-α、IFN-γ移植前后沒有明顯改變。
　　結(jié)論：
　　1.與對照組相比，AA患者骨髓血管nic he、血管旁niche及成骨niche細(xì)胞數(shù)均明顯減少。
　　2.與移植前比較，AA患者a llo-HSC T后1年內(nèi)，血管nic he和血管旁niche細(xì)胞數(shù)增加，在移植后第2月達(dá)高峰，而成骨niche細(xì)胞數(shù)未見明顯改變。
　　3. AA患者allo-HSCT后1年內(nèi)，無供者源骨髓MSCs植入；負(fù)