藁本內(nèi)酯對(duì)c-Myc-MMP信號(hào)通路介導(dǎo)A7r5細(xì)胞遷移中的作用.pdf

1、目的：
　　1)明確藁本內(nèi)酯（Z-ligustilide。L I G)對(duì)大鼠胸動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞（A7r5)迀移的作用。
　　2)研究L I G抑制A7r5細(xì)胞迀移的分子機(jī)制：探討L I G對(duì)c-Myc及M M P s的表達(dá)影響，L I G對(duì)c-Myc的調(diào)控并分析c-Myc與M M P相互作用和關(guān)系。
　　方法：
　　1)采用M T T比色法測(cè)定藁本內(nèi)酯作用細(xì)胞的毒性。
　　2)利用血管緊張素II(Angi

2、otensin II。AngII)誘導(dǎo)A7r5細(xì)胞迀移，構(gòu)造細(xì)胞迀移模型。
　　3)運(yùn)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞迀移實(shí)驗(yàn)評(píng)估藁本內(nèi)酯對(duì)A n g I I誘導(dǎo)的A7r5細(xì)胞迀移作用的變化。
　　4)明膠酶譜法和蛋白免疫印跡法檢測(cè)藁本內(nèi)酯對(duì)AngII誘導(dǎo)的A7 r5細(xì)胞迀移時(shí)MMP2、M M P9以及c-Myc的表達(dá)。
　　5) RNA干擾技術(shù)沉默c-Myc的表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白免疫印跡法檢測(cè)c-My

3、c和M M P2的表達(dá)。
　　6)免疫共沉淀（Co-IP)分析c-Myc與M M P2蛋白之間是否存在相互作用。
　　結(jié)果：
　　1)利用A n g I I誘導(dǎo)A7 r5細(xì)胞迀移構(gòu)建模型，同一時(shí)間不同濃度組的比較可知AngII濃度為1昭/ml作用時(shí)間為12 h細(xì)胞迀移速率達(dá)到（14.49±0.239)高于其他的濃度組（P<0.05)。最終選用1昭/ml濃度的AngII對(duì)細(xì)胞作用12h作為藥物作用條件。
　　2)

4、LIG對(duì)AngII誘導(dǎo)的A7r5細(xì)胞迀移具有抑制作用，在2.5?10^g/ml時(shí)呈濃度劑量依賴關(guān)系，且在濃度為10^g/ml作用12 h細(xì)胞迀移抑制率達(dá)到39％與對(duì)照組有顯著差異（P<0.05)。
　　3)藁本內(nèi)酯能使AngII誘導(dǎo)A7r5細(xì)胞迀移時(shí)細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)的M M P2、c-Myc蛋白表達(dá)下降差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)，而對(duì)M M P9蛋白表達(dá)水平無影響。
　　4)利用小干擾R N A沉默c-Myc的表達(dá)，蛋白免

5、疫印跡法與實(shí)時(shí)熒光定量P C R的結(jié)果顯示沉默c-My c后 AngII誘導(dǎo)M M P2的表達(dá)相較未沉默組有明顯的降低(P<0.05)，且沉默c-Myc后細(xì)胞迀移率下降。
　　5)免疫共沉淀結(jié)果顯示，以抗c-Myc抗體可以共沉淀出M M P2蛋白，沉默c-Myc后MMP2表達(dá)水平明顯下降（P<0.05)。再以MMP2抗體可以反向共沉淀c-Myc。證明c-Myc與MMP2兩個(gè)蛋白之間存在相互結(jié)合作用。
　　結(jié)論：
　　L