經(jīng)血管周圍移植骨髓間充質(zhì)干細胞抑制腹主動脈瘤發(fā)展的實驗研究.pdf

1、目的:
　　腹主動脈瘤(Abdominal aortic aneurysm，AAA)是一種好發(fā)于老年男性的血管退行性疾病，一旦破裂，死亡率極高。腹主動脈瘤的形成包含了一個極為復雜的動脈壁病理性重建過程，其典型特征是細胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)，尤其是彈性蛋白(Elastin，ELN)的合成和降解失調(diào)，以及血管平滑肌細胞(Vascular smooth muscle cell，VSMC)的減少。這些

2、結(jié)締組織的完整性受到破壞，導致動脈壁的強度減弱并發(fā)生擴張。本實驗利用Pluronic F-127作為載體，將骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC）移植于腹主動脈周圍，研究其對腹主動脈瘤發(fā)展的影響。
　　方法:
　　本課題組采取全骨髓貼壁的方法分離骨髓間充質(zhì)干細胞，并進行體外擴增、純化，采取流式細胞術(shù)和三系分化對細胞進行鑒定。將實驗動物分為三組:假手術(shù)組(SHAM)、對

3、照組(CG)、實驗組(EG)，對照組和實驗組均通過胰彈性蛋白酶灌注的方法建立大鼠腹主動脈瘤模型，用Ⅰ型豬胰彈力蛋白酶持續(xù)加壓灌注腎下腹主動脈，保持灌注時間30min。實驗組在造模后將外源性BMSC和Pluronic F-127凝膠混合，均勻外敷于腹主動脈周圍。4周后獲取組織樣本，通過大體觀察和測量血管直徑觀察大鼠組織結(jié)構(gòu)的變化;通過間苯二酚染色觀察各組大鼠彈力纖維的形態(tài);通過平滑肌肌動蛋白(Alpha smooth muscle act

4、in，α-SMA)免疫組織化學染色法確定主動脈壁內(nèi)血管平滑肌細胞的存留情況;通過real-time PCR分析各組大鼠動脈壁內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases，MMP-9)和金屬蛋白酶組織抑制劑-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP-1)的表達情況。
　　結(jié)果:
　　體外培養(yǎng)的細胞陽性表達CD29、90，而陰性表達CD45、34，且經(jīng)成

5、骨、成脂和成軟骨誘導后，茜素紅、油紅、阿辛藍染色均呈陽性，從而證實實驗細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞。采用胰酶灌注法進行造模后，腹主動脈的直徑較原來增加超過50％，符合腹主動脈瘤的診斷標準。4周后進行各項檢測結(jié)果表明，經(jīng)過BMSC治療的實驗組與對照組相比，動脈瘤的擴張率明顯減輕（53.13±30.83％ VS139.37±27.45％，P＜0.01），提示實驗組動脈瘤的發(fā)展受到明顯的抑制;MMP-9的mRNA相對表達水平降低（1.34±0.14

6、 VS2.40±0.14，P＜0.01），而TIMP-1的mRNA相對表達水平升高(0.76±0.18 VS0.48±0.17，P＜0.01)，提示實驗組動脈瘤體中MMP的活性受到明顯抑制，而其組織抑制劑的活性增強;存留的血管平滑肌細胞數(shù)量明顯增多（88.14±8.63 VS48.43±9.03個/高倍鏡，P＜0.01），提示實驗組血管壁中較少的平滑肌細胞發(fā)生凋亡。
　　結(jié)論:
　　采用胰彈性蛋白酶灌注法可以建立穩(wěn)定的大鼠腹