MiNA-1對食管鱗癌細胞KYSE510增殖、侵襲的影響及相關機制的研究.pdf

1、食管癌是人類常見的消化道惡性腫瘤之一。根據(jù)世界癌癥發(fā)病與死亡報告，全球2008年食管癌發(fā)病大約為48.16萬例，全球死亡大約為40.65萬例[1]。食管癌的流行病學特征表現(xiàn)為:不同地區(qū)、國家、種族、性別的食管癌發(fā)病率和死亡率有明顯差異。全球以亞、非、拉一些國家和地區(qū)發(fā)病較高，歐美和大洋洲發(fā)病偏低，我國更是食管癌的高發(fā)區(qū)，且死亡率高，區(qū)域之間發(fā)病率與死亡率差異顯著[2]。消化道腫瘤患者之中存在著異miRNA表達[3]，Konishi[4]

2、等利用RT-PCR技術對106例食管癌及54名志愿者進行研究發(fā)現(xiàn)食管癌患者血清中miRNA-18a的表達量明顯高于正常人，大約為正常人的16倍，食管癌組織miRNA-18a的表達量明顯高于周圍正常組織，食管癌術后患者血清中miRNA-18a的表達量明顯低于術前患者表達水平。目前多數(shù)文獻報告局限于miRNA在ESCC中的表達，其作用機制并未明確闡述。本課題研究了miRNA-1對食管鱗癌細胞體外增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，并探討了其可能的相關機

3、制。miRNA是一類內(nèi)生性的由長度大約20-22個核苷酸組成的非編碼的小分子RNA[5]。miRNA在細胞代謝、化生、增殖和凋亡過程中發(fā)揮了不容忽視的生物作用。多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展與miRNA有著極其密切的關系，miRNA對于腫瘤的早期臨床診斷及提供新的臨床治療策略具備極其重要的新的潛在用途[13]。
　　目的:通過過表達/沉默miRNA-1，檢測miRNA-1在食管鱗癌細胞KYSE510增殖、遷移和侵襲速度。并檢測其相關的靶基因L

4、ASP1與TAGLN2蛋白水平變化，以探討miRNA-1對食管鱗癌可能的作用機制。
　　方法:
　　1、設置實驗組與對照組，KYSE510細胞中過表達miRNA-1的mimics-miR-1組（轉(zhuǎn)染含miR-1模擬物的mimics試劑）為實驗組，對照組為mimics-miR-1 control組（轉(zhuǎn)染不含miR-1模擬物的mimics模擬試劑，此模擬試劑其他成分與mimics一致）;KYSE510細胞中沉默 miRNA-1表

5、達的inhibitor-miR-1組（轉(zhuǎn)染含miR-1抑制物的inhibitor試劑）為實驗組，對照組為inhibitor-miR-1 control組（轉(zhuǎn)染不含miR-1抑制物的inhibitor模擬試劑）。
　　2、應用MTT細胞增殖試驗觀察miR-1在KYSE510細胞中過表達/沉默對細胞增殖的影響。
　　3、應用Transwell小室實驗觀察miR-1在KYSE510細胞過表達/沉默后對細胞遷移及侵襲的影響。

6、　　4、應用Western blot方法檢測LASP1及TAGLN2蛋白表達變化，探討miRNA對食管癌細胞株KYSE510的分子作用機制。
　　結果:
　　1、MTT細胞增殖試驗結果
　　1.1實驗組與對照組差異
　　實驗組（mimics-miR-1組）24h、48h、72hOD值分別為0.894±0.023、1.050±0.013、1.232±0.017低于對照組（mimics-miR-1 control組）

7、的0.963±0.022、1.163±0.030、1.377±0.024;實驗組（inhibitor-miR-1組）24h、48h、72hOD值分別為1.114±0.036、1.390±0.062、1.558±0.030高于對照組（inhibitor-miR-1 control組）的0.968±0.067、1.209±0.027、1.410±0.023,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　1.2實驗結果表明
　　miR-

8、1在ESCC細胞株KYSE510過表達抑制KYSE510增值，miR-1在ESCC細胞株KYSE510表達沉默促進KYSE510增值。
　　2、Transwell小室實驗結果:
　　2.1遷移實驗
　　實驗組(mimics-miR-1組)Transwell小室遷徙實驗24h遷移細胞數(shù)目為112±24低于對照組(mimics-miR-1 control組)的230±32;實驗組(inhibitor-miR-1組)Tran

9、swell小室遷徙實驗24h遷移細胞數(shù)目為181±29高于對照組（inhibitor-miR-1 control組）的130±25，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.2侵襲實驗
　　實驗組(mimics-miR-1組)Transwell小室侵襲實驗24h遷移細胞數(shù)目為125±31低于對照組（mimics-miR-1 control組）的204±42，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);實驗組（inhibitor-mi

10、R-1組）Transwell小室侵襲實驗24h遷移細胞數(shù)目為235±36，高于對照組(inhibitor-miR-1 control組)的116±25，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.3實驗結果表明
　　miR-1在ESCC細胞株KYSE510過表達時KYSE510遷移侵襲能力下降，miR-1在ESCC細胞株KYSE510表達沉默時KYSE510遷移侵襲能力增強。
　　3 Western blot實驗結果<

11、br>　　3.1 LASP1蛋白表達水平變化
　　實驗組（mimics-miR-1組）LASP1蛋白表達量為0.498±0.020，低于對照組（mimics-miR-1 control組）表達量0.642±0.070;實驗組（inhibitor-miR-1組）LASP1蛋白表達量為0.626±0.050，高于對照組（inhibitor-miR-1 control組）表達量0.526±0.030，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。<

12、br>　　3.2 TAGLN2蛋白表達水平變化
　　實驗組(mimics-miR-1組)TAGLN2蛋白表達量為0.370±0.020，低于對照組（mimics-miR-1 control組）表達量0.426±0.030;實驗組（inhibitor-miR-1組）TAGLN2蛋白表達量為0.541±0.050，高于對照組（inhibitor-miR-1 control組）表達量0.421±0.051，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05

13、)。
　　3.3實驗結果表明
　　miR-1在ESCC細胞株KYSE510過表達時LASP1、TAGLN2蛋白表達量降低，miR-1在ESCC細胞株KYSE510表達沉默時LASP1、TAGLN2蛋白表達量升高。
　　結論:
　　1、miR-1在食管癌細胞中過表達時食管鱗狀細胞癌細(KYSE510)增殖及遷移侵襲能力降低;miR-1在食管癌細胞中的表達沉默時食管鱗狀細胞癌細胞(KYSE510)增殖及遷移侵襲能力提