沙門氏菌快速檢測(cè)技術(shù)方法學(xué)評(píng)估及臨床應(yīng)用研究.pdf

1、目的：對(duì)四種快速新型的沙門氏菌檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)估、比較及其臨床應(yīng)用研究，同時(shí)探索能夠?qū)ι抽T氏菌快速鑒定、分型、分析的最佳方法并建立和優(yōu)化臨床標(biāo)本檢測(cè)流程。
　　方法：以生化反應(yīng)聯(lián)合血清凝集法為標(biāo)準(zhǔn)方法分別對(duì)膠體金法、質(zhì)譜法、16S rDNA法、CLSPT法結(jié)果、方法學(xué)、臨床應(yīng)用進(jìn)行研究、比較和評(píng)估。應(yīng)用沙門氏菌膠體金法試劑對(duì)65例臨床腹瀉患者糞便標(biāo)本（其中沙門菌屬感染20例，非沙門菌感染45例）及44株純培養(yǎng)的沙門菌屬菌懸液進(jìn)行檢測(cè)

2、，評(píng)價(jià)膠體金試劑的檢測(cè)性能。同時(shí)應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight MassSpectrometry,MALDI-TOF-MS)16SrDNA、CLSPT(Clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats locus spacer pair typing，

3、CLSPT)方法對(duì)上述分離和純培養(yǎng)的64株已知的沙門菌進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)鑒定符合率，并對(duì)各方法進(jìn)行比較分析。
　　結(jié)果：膠體金法敏感性100％，特異性98.7％，準(zhǔn)確度99.3％，最低檢出限1×106 cfu· ml-1;試劑可實(shí)現(xiàn)A～E不同亞群沙門氏菌檢測(cè)，與其他腸道腹瀉致病菌無(wú)交叉反應(yīng)，且在4℃和37℃避光保存6個(gè)月，檢測(cè)結(jié)果未發(fā)生改變。該檢測(cè)試劑聯(lián)合快速亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液能夠很好的提高沙門菌檢出率。質(zhì)譜技術(shù)，質(zhì)譜儀對(duì)沙

4、門菌的屬水平鑒定率達(dá)100％(64/64);血清型水平上，腸炎沙門菌符合率97.22％(35/36)，鼠傷寒沙門菌為100％(17/17)。CLSPT結(jié)果，擴(kuò)增片段在750bp左右，64株沙門菌經(jīng)CLSPT方法檢測(cè)結(jié)果腸炎沙門菌34株，堿基匹配率為97％-100％，鑒定符合率94.44％(34/36);鼠傷寒沙門符合率100％(17/17)。甲型副傷寒100％(2/2)，乙型副傷寒100％(2/2)。16 srDNA結(jié)果，PCR片段堿基

5、長(zhǎng)度1500bp左右，檢測(cè)出腸炎沙門菌35株，堿基匹配率為99％-100％，鑒定符合率97.22％(35/36);鼠傷寒沙門菌17株，鑒定符合率100％(17/17)。四種方法在屬水平鑒定符合率無(wú)顯著差異(P＞0.05)，在種水平上MALDI-TOF-MS、16SrDNA、CLSPT方法鑒定符合率無(wú)顯著差異(P＞0.05)，三種方法有較高的一致率，和比較滿意的一致性。膠體金法與質(zhì)譜技術(shù)法最為節(jié)省時(shí)間（見表4-9）。如兩種方法聯(lián)合應(yīng)用可為

6、臨床提供快速準(zhǔn)確報(bào)告，具有重要意義。
　　結(jié)論：膠體金法使用非常方便，檢測(cè)速度非?？欤荒軐⑸抽T菌鑒定到屬水平;質(zhì)譜技術(shù)無(wú)論在屬水平還是種水平都有較好的鑒定結(jié)果，且具有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析能力，速度也非?？?CLSPT基于成簇的規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)分型方法的改進(jìn)方法，即CRISPR位點(diǎn)間隔序列分型(C

7、LSPT)法分析位點(diǎn)簡(jiǎn)化、簡(jiǎn)單方便、準(zhǔn)確率高，但結(jié)果影響因素多檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng);16srDNA法，雖然很快很準(zhǔn)但對(duì)沙門氏菌種間堿基分辨率較差。膠體金法和MALDI-TOF-MS法均為目前最為快速的沙門菌檢測(cè)方法，膠體金法最適用于快速初篩檢測(cè)且準(zhǔn)確可靠，可為臨床提供快速的初步報(bào)告，為患者的快速診療提供主要方向，質(zhì)譜技術(shù)最適用于快速鑒定、分型、數(shù)據(jù)分析，可快速的為臨床提供詳細(xì)的病原信息及分析工具，如兩者聯(lián)合應(yīng)用，可互為補(bǔ)充，大大提高臨床標(biāo)本的檢測(cè)